/html/immunology/index.html 生化与免疫技术 zh-cn <a href='http://www.5ibio.com' target='_blank'>Power by DedeCms</a> jurgenyan##yahoo.com.cn /html/immunology/20081220/17976.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17977.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17973.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17974.html 问：我要做病毒检测，现在要把量子点标记到羊抗兔二抗上，有哪位前辈做过量子点标记二抗的免疫荧光技术？ 答：标记应该不难，量子点上有不同的基团，商品化的量子点一般为-NH2或-COOH，你可以根据你量子点上基团的不同，选择不同的活化方法。 问：谢谢这位高手，我的量 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17975.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17966.html 问：我想知道，用什么方法进行酶标记可以非常有效呐？过碘酸钠标记怎么样？ 答：第一节 间接法测抗体 基本原理 将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17967.html 问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。 答：1.1 试剂准备 1) 10mg/mL HRP 2) 0.06mol/L NaIO4 3) 0.16mol/L乙二醇 4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17968.html 非放射性物质标记核酸探针的方法通常是通过在核酸分子中引入诸如半抗原、生物素等惰性小分子。这些小分子一般通过连接到dUTP等核苷三磷酸上。这种经修饰的核苷三磷酸再通过酶促反应掺入到探针中，例如用于随机引物法标记长链探针或是通过末端转移酶标记寡核苷酸的3端。 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17965.html 当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17971.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17972.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17969.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17970.html 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17964.html 摘要 分子信标技术是一种基于荧光共振能量转移现象（FRET）和碱基互补配对原则建立起来的一种分析技术。分子信标作为一种荧光标记的分子探针，具有极强的特异性和较高的灵敏度，目前已经成为基础医学和生物学的重要研究工具。本文着重介绍了分子信标的基本原理及其应用 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17963.html 1996年Tyagi和Kramer首次建立了分子信标探针，最初目的是能在液相中定量测定靶标的量。分子信标技术以其操作简单、灵敏度高、特异性强、可对核酸进行实时定量测定、甚至可以用于活体分析等特点不仅在生物学研究中有着广泛的应用，而且在疾病基因检测与诊断等生物医学基 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17961.html 探针标记方法有： 1、DNA的缺口平移法。缺口平移是一种快速、简便、成本相对较低以及生产高比活性均一标记DNA的方法。该技术可以制备序列特异的探针。当使用重组质粒探针时，虽然任何形式的双链DNA都可以进行缺口平移标记。但通常使用限制性核酸内切酶将插入片段进行酶 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17962.html Tyagi和Krammer于1996年设计了一种可以特异性识别核酸序列的新型荧光探针,这种荧光探针通过与核酸靶分子进行杂交后发生构象的变化而发出荧光,他们将其命名为分子信标(Molecular Beacon)。 分子信标具有背景信号低,灵敏度高、特异识别性强、操作简单，不必与未反应的探 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/20081220/17960.html 一、背景 近几年来，申报的合成多肽类新药越来越多，如依降钙素、丙氨瑞林、胸腺五肽、胸腺素1、奥曲肽、生长抑素等品种。这类新药与普通的化学药品在合成、结构确证及质量标准等方面的要求均不完全相同，并且我们的药学审评人员均未从事过这方面的研究工作。以前对于 2008-12-20 生化与免疫技术 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17896.html 【摘要】 目的构建和表达抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体，并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3/抗CD20微型双功能抗体，并用双脱氧终止法测定DNA序列；采用亲和层析法纯化该产物，并用Western blot和分子排阻层析鉴定纯化产物；采用 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17895.html 【摘要】目的 构建抗CD20嵌合抗体Fab'和F（ab）2片段表达载体，并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达，比较二者的活性差异。 方法 从相应的杂交瘤中提取mRNA建立抗CD20 ScFv 噬菌体显示文库，利用PCR方法从阳性克隆扩增抗CD20抗体轻链可变区基因（VL）、重链可变区基 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17894.html 一、Bispecific antibodies introduction Bispecific antibodies usually do not occur in nature but are constructed by recombinant DNA or cell-fusion technologies. Most are designed to recruit cytotoxic effector cells of the immune system effectively ag 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17892.html 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 一、用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17893.html 一、将小鼠固定好，将尾巴拉直，绷紧 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部， 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17891.html 一、多克隆抗体的概念 抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17888.html 一、抗原多肽设计的基本原则 为了使生产抗体获得最佳效果，仔细地设计抗原多肽是很有必要的，设计应满足一个基本条件：在免疫过程中，该抗原既不会产生过强的免疫反应，同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。尽管抗原设计是一个很复杂的课题，有诸多需要注意 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17889.html 一、识别并特异性结合抗原 （ Recognition and bind antigen specifically ） 识别并特异性结合抗原是免疫球蛋白分子的主要功能，这种特异性主要是由免疫球蛋白V 区的空间构型所决定。免疫球蛋白分子有单体、二聚体和五聚体等几种所谓的体形式。只有1 个Y 形分子组成的 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17890.html 回顾20世纪，分子生物学及其相关学科的发展给科学研究和人类生活带来了日新月异的变化，同时也更新了一些传统概念。比如，自20世纪30年代以来，人们一直认为所有的酶都是蛋白质。1986年，Lerner等首次研制成功催化水解羧酸酯的抗体，称之为抗体酶（Abzyme）。1987年，C 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17887.html 一、保存 大多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前，冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。 对于含Cys， Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17885.html Fusion is an important procedure to produce monoclonal antibodies (MoAb). 一、Protocol 1、prepare the culture of myeloma cells and maintain the concentration of the cells at the level of less than 10 6 cells/ml (IMDM 10% FCS/FBS). Just before the fu 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17884.html 【摘要】目的探讨嵌合抗CD20抗体Fab片段的抗肿瘤机制。方法应用MTT法检测Fab片段对Raji细胞生长的抑制作用，用Annexin V-FITC和PI测定Fab片段对Raji细胞凋亡的诱导作用，用RT-PCR和Western blot检测Raji细胞中bcl-2表达的变化。结果嵌合抗CD20Fab片段对Raji细胞具有明 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17881.html 应用单克隆抗体技术抗肿瘤的导向治疗是恶性肿瘤的生物治疗方法之一。本文先介绍了单克隆抗体的特点和构型及研究现状，而后从非结合型单抗、单克隆抗体偶联物（包括化学免疫偶联物、放射免疫偶联物、免疫毒素、抗体导向酶－前体药物疗法）和其它（抗体－细胞因子融合蛋 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17882.html 【摘要】为了研究嵌合抗CD20基因工程抗体Fab的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制，本研究利用3H掺入法测定嵌合抗CD20 Fab对Raji细胞生长的影响，结果显示嵌合抗CD20 Fab对Raji细胞的生长具有抑制作用；利用流式细胞仪测定嵌合抗CD20 Fab诱导Raji细胞凋亡作用，结果显示嵌合抗CD 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17883.html 血管新生（angiogenesis）是一个受严格调控的多步骤过程，导致从已存在的脉管系统形成新的血管，对肿瘤的生长及转移，均是必需的。通过抑制新血管生成，中断肿瘤的营养供给，达到治疗目的，它代表了近年来一种治疗肿瘤及其它与病理性血管生成有关的人类疾病的新策略。 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17880.html 本文已发表于中国肿瘤生物治疗杂志．2003，10（3）：221-222． 【摘要】表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor EGFR）是原癌基因ｃ-erb-B1的表达产物。其过表达和突变体均与肿瘤发生发展有密切关系，基于此优点成为目前肿瘤治疗的新靶点。本文就EGFR与肿 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17878.html 一、免疫失败的可能原因及应采取的措施 有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。 1、免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。 2、抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17879.html 一、抗体的定义和第一代单克隆抗体（经杂交瘤细胞生产） 抗体是在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一类糖蛋白。它是能与相应抗原特异的结合、产生各种免疫效应（生理效应）的球蛋白。国际卫生组织将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的一类蛋白统一命名为免疫 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17876.html 杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠B细胞和小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长（选择原理见后），小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖， 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17877.html 在过去的二十五年里，利用杂交瘤细胞生产了成千上万的鼠单克隆抗体。人们用同样的技术从转基因鼠中克隆人类的抗体，并设计了全长型抗体和重组片段，它们可以被用于多种诊断和治疗。而且如果他们能在哺乳动物细胞，牛奶及植物中表达，就可以大量获得。 一个世纪以前，Pa 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17874.html 在单克隆抗体制备中，首先进行的就是抗原的设计与合成，这是制备单抗成功与否的关键。因为产生抗体的特异性与亲合性是与抗原密切相关的，合成的抗原如果可以将所需要的抗原决定簇充分暴露出来，那么机体更容易识别抗原决定簇，从而免疫的动物所产生的抗体自然会在特异 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17875.html 一、概念 佐剂（adjuvant）是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质，应用时可与抗原同时或预先注射于机体。佐剂本身可以有免疫原性，也可以没有免疫原性。 应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性，从而提高抗体的效价。颗粒性抗原（如细菌、细胞）因具 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17873.html 一、杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17872.html 目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17870.html 一、单链丝状噬茁体展示系统 1、pIII展示系统及噬苗体抗体 丝状噬茵体是单链DNA病毒，pIII是病毒的次要外完蛋白（minor coatprotein）、位于病毒颗粒的一端，每个病毒颗粒都有35个拷贝pIII蛋白，pIII有两个位点可供外源序列插入，即N端和近N端可伸屈胃内。当抗体片段或 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17868.html 一、概况 噬菌体展示技术（Phage Display Technology）在80年代中期产生， Smith G第一次描述了在丝状噬菌体表面展示外源多肽片段的原理。该办法主要是用DNA重组技术将大量的多肽编码顺序导人噬菌体的衣壳蛋白基因中，从而使表达出的各种多防以与PIII或PVIII蛋白融合的 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17869.html Adsroption of Anti-E. coli Antibodies Grow E. coli strain Y1090 in L broth at 37C overnight. Transfer to 10 mM MgSO4 and store at 4C for future use. These cells are good for about 1 week. Soak one 132 mm nitrocellulose membrane per Petri dish in 10m 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17863.html 1、Required Materials and Equipment (1) Protein A or G agarose gel column (10 ml or 5 ml of packed beads; see guidelines below for choice of protein A or protein G) (2) Ice-cold Tris-buffered saline (TBS). See recipe below (3) 5% sodium azide soluti 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17861.html 1. use 2 mg of antibody per ml wet beads (use appropriate antibody/protein A or G combination). 2. mix antibodies with beads and bind at room temperature for at least 1 hr (on roller). 3. wash the beads twice with 10 volumes borate buffer, spin each 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17862.html 1. Materials (1) Antibody 7E3, 2L sup grown in flasks, frozen and thawed overnight. (2) BioRad Affi-Gel Protein A MAPS II Buffers cat. #1530-6160 ($161.00) (3) 50 mM Tris pH7.8. (4) 40 g ammonium sulfate for every 100 ml Sup. (5) 4L 100 mM Tris/pH7. 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17859.html 1. Reagent and Materials (1) Hi-Trap Protein G Column (Pharmacia Biotech #17-0404-01) (2) 20 mM Sodium Phosphate Buffer, pH 7.0 1.084 g NaH 2 PO 4 , anhydrous 3.273 g Na 2 HPO 4 .7H2O q.s. to 1 liter with di-H 2 O (3) 0.1M Glycine, pH 2.8 3.75 g Gly 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网 /html/immunology/antibody/20080927/17860.html This protocol includes an ammonium sulfate cut, affigel blue chromatography and affinity chromatography. 1. Solutions (1) Affigel Blue Prewash 0.1 M acetic acid 5.7 ml glacial acetic acid 1.4 M NaCl 81 g NaCl 40% isopropanol 400 ml isopropanol up to 2008-09-27 抗体抗原实验 秩名 生物实验网