/html/PCR/index.html PCR实验 zh-cn <a href='http://www.5ibio.com' target='_blank'>Power by DedeCms</a> jurgenyan##yahoo.com.cn /html/PCR/20080927/17898.html Methylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of methylation patterns from very small samples of DNA, including those obtained from p 2008-09-27 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20080802/17746.html SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸的改变而导致的核酸序列多态性。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP在人基因组中的发生频率比较高，大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点。 2008-08-02 PCR实验 admin 本站 /html/PCR/baseinfo/20071111/15129.html 高度特异性地扩增所需的片段是PCR最基本的要求，影响PCR特异性的因素很多，包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等，而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程，也为PCR产物快速有效的纯化（PCR产物直接纯化）打下了基础。这类酶最典型的代表是 2007-11-11 PCR基础知识 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20071031/13676.html SSCP法除大量地用于基因突变的检测外，还用于病毒的分型、监测PCR实验中的污染 情况、以及病原体传播途径的研究中.YaP用巢式PCR对来自不同国家和地区的HbV标品 进行了检测，并对扩增产物进行了SSCP分析，发现每个标本的SSCP图谱完全不同，不 仅证明了HbVDNA具有地区性变 2007-10-31 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20071031/13675.html 不同序列组成的单链 DNA 或 RNA 在非变性聚丙烯散胶凝胶中电泳 , 会因其空间构象不同表现出不同的迁移率。因此 , 可以将基因组中特定的 DNA 片段用 PCR 方法扩增 , 然后变性成为单链 , 在非变性聚丙烯酷胶凝胶中进行电泳 , 与对照的 DNA 片段进行比较 , 只要它们之间存 2007-10-31 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20071025/12927.html 利用限制性内切酶能识别DNA分子的特异序列，并在特定序列处切开DNA分子，即产生限制性片段的特性，对于不同种群的生物个体而言，他们的DNA序列存在差别 2007-10-25 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20071025/12926.html PCR检测在性传播性疾病(STD)的诊断中有较广泛的应用。经典的性传播疾病有梅毒、淋病、腹股沟淋巴肉芽肿、软锐湿疠、硬下疳等。而在现代STD中、解尿支原体及沙眼衣原体引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意义 2007-10-25 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20071009/12902.html 经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题 2007-10-09 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070914/12876.html 采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多 。 扩增产物的检测在PCR扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由仪器自动完成，因此整个检测所需的时间比普通PCR要节省许多 2007-09-14 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070914/12875.html Real-time PCR is an extremely powerful technique, however, often its results are open to interpretation since there is no convention for data presentation. This anomaly has arisen because many applications rely on non-standard calibration genes 2007-09-14 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070914/12874.html 时荧光定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，不仅要求在实验前有比较完整的实验设计方案，而且实验的条件对实验结果的影响也非常大 2007-09-14 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070912/12872.html 1992年，Sano等人将免疫测定技术与PCR结合，创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术，即免疫-PCR（Immuno-PCR），随着这种技术的不断发展，2000年，Sim等使用荧光定量PCR代替普通PCR，发展了免疫定量PCR技术（real-timeimmuno-PCR）。 2007-09-12 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070912/12871.html 定量PCR除可以对样品的初始浓度进行准确定量外，还有其它多种丰富的应用。还包括基因表达调控情况的分析、等位基因的分析等，那么这些功能是如何在一台定量PCR仪上实现的呢 2007-09-12 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070912/12870.html 一般Taqman定量PCR实验过程为：目的基因查找比对→探针与引物设计→探针与引物合成→配置反应体系→反应参数→重复实验，优化条件→获得曲线数据，比对标准曲线→再重复验证 2007-09-12 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070911/12869.html 定量PCR（Q－PCR）是一种对目的基因定量的快速高效的方法。在真核细胞里，定量－反转录－PCR（Q－RT－PCR）也在采用稳定表达的看家基因做参照的情况下用于基因表达的检测 2007-09-11 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070911/12868.html 定量PCR（Q－PCR）是一种对目的基因定量的快速高效的方法。在真核细胞里，定量－反转录－PCR（Q－RT－PCR）也在采用稳定表达的看家基因做参照的情况下用于基因表达的检测 2007-09-11 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070911/12867.html 少量的DNA 序列的准确定量曾经是一件很难很累的事情，不过real timePCR 的出现把它变为和普通PCR 差不多一样容易。原理是利用能特异标记PCR产物的荧光物质，显示PCR 产物的动态累积，得到S 型的扩增曲线；假设该曲线的前期PCR 符合指数性扩增，于是在单纯指数方程的基础 2007-09-11 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/realtimepcr/20070911/12866.html 所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加 2007-09-11 Real-Time PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20070821/12444.html 高等植物在其生命活动过程中，由于基因的选择性表达，决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中，都有不同的基因起作用。因此，研究基因的选择性表达 2007-08-21 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20070821/12443.html 运用mRMA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况，为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理,优点与缺点, 2007-08-21 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20070802/12208.html 随机引物PCR（Arbitrary - primer PCR，缩写为AP-PCR）又称随机扩增多态性DNA（Random amplified polimophic DNA，缩写为RAPD），是Williams和Welsh等1990年在PCR的基础上发展起来的一种实验技术。在RAPD扩增中，仅用一个8-10碱基的寡核苷酸引物，引物的序列是随机的。R 2007-08-02 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070802/12207.html 在整个PCR体系中, 引物（primers）占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非目的DNA结合，PCR的灵敏性要求DNA聚合酶能对引物进行有效的延伸，可见引物设计好坏与PCR结果密切相关。。。 2007-08-02 PCR实验 admin 本站 /html/PCR/20070801/12203.html PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中 2007-08-01 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070730/12198.html PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对 2007-07-30 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/otherpcr/20070723/12179.html 聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变 2007-07-23 其他PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/trpcr/20070610/11860.html In the one-step protocol, the components of RT and PCR are mixed in a single tube at the same time. The one-step protocol generally works well for amplifying targets that are reasonably abundant 2007-06-10 RT-PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/trpcr/20070605/11852.html RT PCR原理flash演示,If you do not understand PCR/RT PCR, or want to refresh your memory, This is a good shockwave animation of RT PCR from Cold Spring Harbor Laboratory Learning Center 2007-06-05 RT-PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11796.html PCR 常见问题解答 本文主要内容 1. PCR 常见问题解答 2. PCR 引物设计及软件使用技巧 3. Primer Premier 5.0 的使用技巧简介 4. Oligo 6.22 使用技巧简介 一.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11805.html PCR 污染原因与相应的解决办法 PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染 即可造成假阳性的产生. 污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11804.html 分子生物学一线实验人员软件解决方案 在互联网上，有很多软件可以解决分子生物实验人员从立项到最后写论文 的实际问题。本文提供对相同作用的很多软件进行比较后推荐给一线实验人员使用的Windows软件。 一、资料收 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11803.html 甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃ 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11801.html PCR 引物设计及软件使用技巧 自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一[1]，而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11802.html 核酸分子杂交的原理和实验方法 原理 ?所谓DNA探针，实质上是一段已知的基因片段，应用这一基因片段即可与待测样品杂交。如果靶基因和探针的核苷酸序列相同，就可按碱基配对原则进行核酸分子杂交，从而达到检查样品 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11800.html RNA 分离纯化操作专用试剂选购指南 RNA的操作在核酸研究中非常重要，但必须特别注意两个问题： （一）RNA的降解 ：由于RNase的存在（如实验器皿、样品、试剂等）且难以清除，使得RNA 的大幅降解，最终影响RNA的产量 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11798.html DNA的提取的原理和方法 为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适当的材料提取DNA。 * 动植物中，小牛胸腺动物肝脏鱼类精子，植物种 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11799.html 各种不同样品DNA提取的建议: (1)福尔马林浸泡标本的DNA提取 1. 福尔马林对DNA有一定的破坏作用，因此提取的工作很有难度。如果有条件最好使用试剂盒，另外组织尽量不要取边缘的，用PBS洗上几次，延长蛋白酶消化时间 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/20070528/11797.html 2007-05-28 PCR实验 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11795.html 非修饰的引物的Molecular Weight在随引物提供的报告单上都有明确的标示。如果需要估计一个引物的分子量按每个碱基的平均分子量为324.5，引物的分子量=碱基数 x 碱基的平均分子量 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11794.html 需要什么级别的引物？ 答：引物常用的纯化方式C18脱盐，OPC纯化，PAGE纯化，HPLC纯化。根据实验需要，确定订购引物的纯度级别 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11793.html 前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11792.html Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11791.html 本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上，详 细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11790.html Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11789.html PCR-引物设计原则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11788.html 收集一些常用β-actin 的引物序列 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11787.html PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/PCR/primer/20070528/11786.html 在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中，都需要使用寡核苷酸作为探针或引物，而对这些反应的质量起最重要影响作用的，就是这些寡核苷酸探针或引物 2007-05-28 引物设计 秩名 生物实验网 /html/DNA/clone/20070425/11716.html 通常PCR反应以后还要对产物进行酶切才能进入下一步工作。为了方便起见，我们可以将内切酶直接加入到PCR反应产物中去，而省略了纯化产物的步骤。下表归纳了在PCR产物混合物中各种限制性内切酶的酶切活性 2007-04-25 DNA克隆 秩名 生物实验网 /html/PCR/trpcr/20070405/11569.html M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册 一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5M-MLV Reaction Buffer 100l 250l dNTP Mix,10mmol/L 25l 55l Oligo-p(dT) 18 Primer, 0.5g/l 25l 55l Random Primer p(dN) 9 , 0. 2007-04-05 RT-PCR 秩名 生物实验网 /html/PCR/trpcr/20070405/11545.html hi there, i am noew constantly getting a late peak (30+ cycles) in the negative controls for my real-time pcr (SYBR Green, iCycler). i have even bought in new nuclease free water to run as my negativ 2007-04-05 RT-PCR 秩名 生物实验网