/html/RNA/RNAbase/index.html RNA实验 / RNA基础 zh-cn <a href='http://www.5ibio.com' target='_blank'>Power by DedeCms</a> jurgenyan##yahoo.com.cn /html/RNA/RNAbase/20070818/12367.html 从黄化小麦苗中提取总RNA，可以为cDNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度，尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA是单链，2’OH是它的化学性质远比DNA活泼。所以，提取RNA颇为不易。加之RNA得不均一性，要将所有的RNA（rRNA、tRNA、mR 2007-08-18 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070807/12223.html 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸 2007-08-07 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070807/12221.html 最糟糕的心态-实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂 2007-08-07 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070412/11595.html 近年来的研究表明,一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制 2007-04-12 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2573.html RNA提取方法 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2572.html 棉花RNA的提取 2007-01-09 RNA基础 秩名 wheat.pw.usda.gov /html/RNA/RNAbase/20070109/2571.html AMES/Chloroform extraction in our lab to extract total RNA from potato leaves for viroid analysis. The protocol is as follows 2007-01-09 RNA基础 秩名 wheat.pw.usda.gov /html/RNA/RNAbase/20070109/2570.html 3 g nodules (fresh or frozen in liquid N2) were ground to a powder in mortar and pestle with liquid N2. To the powder was added ice cold 0.5 M mannitol (or sucrose 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2569.html 酵母RNA的提取：Spin down cells, decant, and resuspend in 0.2 ml extraction buffer with SDS and transfer to a 1.5 ml eppendorf tube. The cells can be frozen at –70oC at this point for up to several weeks 2007-01-09 RNA基础 秩名 www.ciwemb.edu /html/RNA/RNAbase/20070109/2568.html RNase Protection Assay (RPA) 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2567.html For quantitating RNA levels from either polyA+ selected RNA or crude RNA preps. 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2566.html Diethyl pyrocarbonate derivitizes histidine residues and is therefore an effective method to inactivate nucleases including RNAse 2007-01-09 RNA基础 秩名 omrf.ouhsc.edu/~frank /html/RNA/RNAbase/20070109/2565.html How to make DEPC-treated Tris buffers: DEPC will react with primary amines and cannot be used directly to treat Tris buffers. DEPC is highly unstable in the presence of Tris buffers and decomposes rapidly into ethanol and CO2 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2564.html For oligo(dT)-cellulose chromatography, omit steps 4 & 5, but add 50ul 5M NaCl and chromatograph immediately, or freeze on dry ice and store at -70 for future chromatography. 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2563.html 密度梯度法提取总RNA 2007-01-09 RNA基础 秩名 wheat.pw.usda.gov /html/RNA/RNAbase/20070109/2562.html This is the preferred method for yeast RNA preparation use Gloves and RNAse free solutions throughout 2007-01-09 RNA基础 秩名 Tsukiyama Lab /html/RNA/RNAbase/20070109/2561.html 拟南芥和烟草总RNA提取 2007-01-09 RNA基础 秩名 Bartel Lab Whitehead Institute /html/RNA/RNAbase/20070109/2560.html Obtain a rat which has been fasted for 24 hours (to remove glycogen from the liver), decaptitate, exsanguinate and remove the liver as rapidly as possible 2007-01-09 RNA基础 秩名 homepages.gac.edu /html/RNA/RNAbase/20070109/2559.html RNA提取方法 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2558.html TRIzol method for RNA isolation 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2557.html ShortPAXgeneProtocol: - spininstep6increasedto20min;noDnasetreatment;optionalwashafterstep12REQUIRED 1. CentrifugethePAXgeneBloodRNATubefor10minat3000–5000 xg usingaswing-outrotor. Note:Ensurethatth 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2556.html PreparationofCells Prepareorcollectbetween2x10 7 cellsforeachmRNAprep(willyieldabout10-20gofmRNA).IfPBMCsfromawholebloodsamplearetobeused,thesampleshouldbepreparedwithFicoll-Paqueaccordingtothemanufa 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2555.html All solutions used in RNA preparation should be treated with DEPC as follows 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2554.html TRIZOL法提取RNA 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2553.html Trizol法分别提取细胞核和细胞质RNA 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2552.html 总RNA提取方法 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2551.html Bake all necessary glassware, metal spatulas, mortars, and pestles overnight in a 200°C oven after wrapping them in aluminum foil. For each sample 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2550.html 在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20070109/2549.html RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术 2007-01-09 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061203/1997.html RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因， 2006-12-03 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061203/1996.html RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的,也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5% 2006-12-03 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061203/1995.html 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中， 2006-12-03 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061203/1994.html RNA 的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等 2006-12-03 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1471.html 1. Snap freeze ~10 7 cells or ~100 mg of tissue in liquid nitrogen or dry ice/ethanol. 2. Transfer the frozen sample to a mortar and pestle and grind to a fine powder. Or use a hand-held tissue grind 2006-10-07 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1472.html 2006-10-07 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1473.html CONCERT细胞质RNA纯化试剂是一种新颖的单相酚溶液，是专门设计用来从新鲜或冷冻的培养的动物细胞或组织中快速、简单地纯化高质量的细胞质RNA。 应用 利用CONCERT细胞质RNA试剂分离的总RNA能够用于构建cDNA文库，RT 2006-10-30 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1464.html 的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成,最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端,方法简便易行。该系统试剂包括： 20g 特异性引物 200l M-MLV第一链缓冲液(5)， 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1465.html S1 Nuclease Protection Assay End-label oligo (20-25 mer) 4 l 5X T4 Kinase Buffer 5 l [gamma-32P] ATP (7000 Ci/mmol) 10 l water + oligo (200 ng) 1 l T4 Kinase 1. 37 deg C for 1 hour. 2. Heat inactivat 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1462.html 第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析; 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1463.html nker),接头可以是限制性内切酶识别位点片段,也可以利用末端转移酶在载体和双链cDNA的末端接上一段寡聚dG和dC或dT和dA尾巴,退火后形成重组质粒,并转化到宿主菌中进行扩增。合成的cDNA也可以经PCR扩增后再克隆入适当载 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1469.html S1 analysis of yeast mRNA using oligonucleotide probes Steve Hahn. last modified Sat, Oct 17, 1998 Mix the following in an 0.5 ml eppendorf tube: 10-20 micrograms total yeast RNA 10 microliters hybri 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1470.html Primer Extension analysis of total yeast RNA 1. Mix the following in a 1.5 ml eppendorf tube: a. 20-80 micrograms yeast RNA dissolved in H20 (the amount will depend on the level of expression for the 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1467.html The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by the discovery and characterization of DNA-dependant 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1468.html 1. Add appropriate volumes of RNA (12 ul) plus probe ( 3 ul). Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe. 2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml stock. 3. Add 20 ul 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1466.html Ribonuclease Protection Assay contributed by James McCaughern-Carucci, Yale University Most RNase Protection protocols require an overnight hyb with numerous subsequent clean-up steps. This method re 2006-09-24 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1460.html 1，用异硫氰酸胍提取 提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1461.html 完整 RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1457.html 如何确定RNA质量的经验谈 1）检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为R 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1458.html mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网 /html/RNA/RNAbase/20061111/1459.html 真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取 2006-09-19 RNA基础 秩名 生物实验网