|
Clontech公司最新推出的Living Colors Fluorescent Timer，是唯一一种能随着时间的延长而由绿色变为红色的的荧光蛋白报告基因。这种颜色可变的荧光蛋白为实时研究启动子的调控时效提供了可能：在活细胞或者活的生物体内，你不但可以看到某个启动子什么时候、在什么位置开始启动基因的表达，还可以观察到它什么时候关闭表达——这在以前是不可能实现的——而且由于这种报告基因是荧光蛋白，这种监测可以直接进行而无需其它更多的步骤或者辅助因子。
这种叫Fluorescent Timer的荧光蛋白是以前Clontech的红色荧光蛋白DsRed的突变型，在表达后大约3小时由绿色荧光变为红色荧光。（Clontech公司此前提供4种不同颜色的荧光蛋白，分别为绿色（EGFP，加强型绿色荧光蛋白）、蓝色（ECFP）、黄色（EYFP）、红色（DsRed），其中蓝色（ECFP）和黄色（EYFP）是绿色（EGFP）的突变型，而红色（DsRed）则为来源不同的另一种蛋白）。只要检测红、绿光的比率（重叠时为黄色），就可以推测出这个启动子开启和关闭的时间，也就可以确定目的蛋白的表达时间和存在时间。
Figure 1. Fluorescent Timer lets you visualize changes in promoter
activity. A transgenic C. elegans embryo containing Fluorescent
Timer fused to the heat shock promoter hsp16-41 was heat-shocked
by flotation in a 33°C water bath. Promoter activity was studied
during the heat shock recovery period. Images were taken with a
Chroma Polycroich beam-splitter 86100bs filter set and analyzed
with MetaMorph Software. If both green and red fluores-cence are
present, the two colors together appear yellow in an overlay.
两小时后出现绿色荧光，表明hsp16-41启动子开始表达，50小时后绿色荧光消失，表明启动子关闭。
Fluorescent Timer不但让你在空间上确定启动子表达产物的位置，还可以
让你看到在生长过程中启动子的活力随时间的变化。
Fluorescent Timer以两种方式提供：一种是质粒pTimer(Cat.No.6941-1)，方便用户将Fluorescent Timer报告基因切下来，克隆到用户自己的载体上，另一种是质粒pTimer-1(Cat.No.6942-1),是一个没有启动子的载体，方便用户将待研究的启动子克隆到这个载体上，直接进行研究。
上一篇：简化SSH法寻找差异表达基因 下一篇：FITC标记抗体流程
|
简化SSH法寻找差异表达基