|
在重组蛋白纯化的过程中，研究者常常利用融合表达的各种亲和标签，通过一步法亲和纯化的方法获得自己的目的蛋白。其中，6×His•Tag标签因其氨基酸个数少、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便，成为大家常用的选择。但是，His Tag并非万能标签，依然有不少使用限制因素，如：对重金属离子敏感、不适合金属离子螯和层析方法的蛋白；活性不稳定的蛋白；对蛋白纯度要求更高等。所以，研究人员仍然需要不断寻找更适合自己的亲和标签。
Novagen最新推出的Strep•Tag II 8氨基酸小标签，就是一个新选择。我们早已熟知biotin和streptavidin之间能够高度特异的结合，这种特异性结合早已广泛用于免疫或者非放标记反应中。Novagen模拟Biotin设计了一个8个氨基酸的小标签Strep•Tag II，正好能特异的结合到streptavidin上，又再改造优化streptavidin与小标签的结合位点，使之与Strep•Tag II融合标签的结合力超出普通streptavidin约100倍，称为Strep•Tactin蛋白。当表达产物经过Strep•Tactin亲和纯化柱时，融合表达Strep•Tag II的融合蛋白高特异地结合在亲和柱上，经过反复洗涤杂蛋白后，可以用一种生物素的类似物——2.5 mM脱硫生物素，在温和的PBS或者其他生理条件缓冲系统就能彻底洗脱目的蛋白，温和条件有助于保持蛋白的活性。
-
一步法快速亲和纯化，获得高达95％纯度目的蛋白
-
替代金属离子螯和层析方法，避免重金属离子对蛋白的干扰
-
洗脱条件温和，保持蛋白活性和空间结构
-
系列携带Strep•Tag II 融合标签的原核、昆虫、哺乳动物细胞表达质粒，满足各种蛋白表达需要
-
各种预装柱及配套试剂盒，适合手动及FPLC纯化不同要求
-
丰富齐全的辅助产品，包括Strep•Tag II融合标签单抗、HRP 耦联单抗、携带 Strep•Tag II 标签的蛋白Marker |
 |
|
各类携带Strep•Tag II融合标签的载体特性 |
|
|
pET-51b(+) |
pET-52b(+) |
pIEx-8 |
pIEx-9 |
pIEx-10 |
pTriEx-5 |
pTriEx-6 |
pTriEx-7 |
|
宿主系统及启动子 |
E.coli
T7lac启动子 |
√ |
√ |
|
|
|
√ |
√ |
√ |
|
昆虫 细胞
e1/hr5 |
|
|
√ |
√ |
√ |
|
|
|
|
昆虫细 胞10启动子 |
|
|
|
|
|
√ |
√ |
√ |
|
哺乳动物CMV
ie启动子/ 增
强子 |
|
|
|
|
|
√ |
√ |
√ |
|
N端特性 |
信号肽序列 |
|
|
|
|
√ |
|
|
√ |
|
Strep•Tag II |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
|
Ek/LIC
位点 |
√ |
|
√ |
|
√ |
√ |
|
√ |
|
3C/LIC
位点 |
|
√ |
|
√ |
|
|
√ |
|
|
C端特性 |
Thrombin
位点 |
|
√ |
|
√ |
|
|
√ |
|
|
His•Tag |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
|
复制子
|
低拷贝ColE1(pBR) |
√ |
√ |
|
|
|
|
|
|
|
高拷贝ColE1(pUC) |
|
|
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
|
抗性 |
|
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
√ |
Introductory Strep•Tag® II Kit, pET-51b货号：71615-3
Introductory Strep•Tag® II Kit, pET-52b货号：71616-3 推荐试剂盒：分别含pET-51b、pET-52b载体；配套纯化预装柱、缓冲液及检测用抗体。
|
• |
1 |
Strep•Tactin Superflow Column 1 ml |
|
• |
120 ml |
1X Strep•Tactin Wash Buffer |
|
• |
25 ml |
1X Strep•Tactin Elution Buffer |
|
• |
120 ml |
1X Strep•Tactin Regeneration Buffer |
|
• |
20 ml |
Strep•Tag II Antibody, HRP Conjugate |
|
• |
10 mg |
pET-52b(+) DNA |
|
• |
0.2 ml |
Induction Control D | |
上一篇：原核表达--宿主菌株选择指南 下一篇：Western Blotting前传：想成为高手吗？
|
原核表达--宿主菌株选择指
