② 每克菌加8μL PMSF 及80μL 溶菌酶，搅拌20 min ；边搅拌边每克菌加4 mg 脱氧胆酸（在冷室中进行）。
③ 37 ℃ ，玻棒搅拌，溶液变得粘稠时加每克菌20μL DNase I。室温放置至溶液不再粘稠。
（2 ）超声破碎法。声频为15-20 kHz 的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎，在处理少量样品时操作简便，液体量损失较少，同时还可对染色体DNA 进行剪切，大大降低液体的粘稠度。
① 收集1 L 诱导表达的工程菌，40 ℃ ，5000r pm 离心，15 min ；弃上清，约每克湿菌加3 mLTE 缓冲液。
② 按超声处理仪厂家提供的功能参数进行破菌；10 000g 离心，15min ，分别收集上清液和沉淀。
③ 分别取少量上清和沉淀，加入等体积的2× 凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS -PAGE 。
注意事项：超声破碎与声频、声能、处理时间、细胞浓度、菌种类型等因素有关，应根据具体情况掌握；超声波破菌前，标本经3 -4 次冻溶后更容易破碎。
2 ）包涵体的分离
蛋白质在细菌中的高水平表达，常形成相差显微镜下可见到的细胞质颗粒，即为包涵体，经离心沉淀后可用Triton-X100 / EDTA 或尿素洗涤，若为获取可溶性的活性蛋白，须将洗涤过的包涵体重新溶解并进行重折叠。
（1）试剂与配制
① 洗涤液I：
0.5 % Triton X -100
10 mmol / L   EDTA ( pH 8 . 0 )
溶于细胞裂解液中。
② 2×凝胶电泳加样缓冲液。
（2）细胞裂解混合物12 000g 离心，15 min , 4 ℃ ；弃上清，沉淀用9× 洗涤液l 悬浮；室温放置5 min ; 12 000g 离心15 min , 4 ℃ ；吸出上清，用100 μL 水重新悬浮沉淀；分别取10 μL上清和重新悬浮的沉淀，加10 μL 2× 凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS-PAGE 。
3 ）包涵体的溶解和复性
（1）试剂与配制
① 缓冲液I：
1 mmol / L PMSF
8mol /L 尿素
10 mmol / L DTT
溶于前述裂解缓冲液中。
② 缓冲液Ⅱ：
50 mmol / L KH₂PO₄
1 mmol / L EDTA ( pH 8 . 0 )
50 mmol / L NaCI
2 mmol / L 还原型谷胱甘肽
1 mmol / L 氧化型谷胱甘肽
③ KOH 和HCI 。
④ 2×凝胶电泳加样缓冲液。
（2）用100 μL 缓冲液I 溶解包涵体；室温放置lh ；加9×缓冲液Ⅱ，室温放置30 min ，用KOH 调pH 到10.7 ；用HCI 调至pH 8 . 0 ，在室温放置至少30 min ; 1000g 离心，15 min ，室温；吸出上清液并保留，用100 μL 2×凝胶电泳加样缓冲液溶解沉淀；取10 μL 上清，加10 μL 2× 凝胶电泳加样缓冲液，与20 μL 重新溶解的沉淀进行SDS-PAGE 。

四、注意事项
（1）不同的大肠杆菌表达载体带有不同的启动子和诱导成分。实验者必须根据特定系统和用途决定相应的实验方案。
（2）表达和检测时，应设置对照组，如转化载体和非诱导细胞。
（3）由于大肠杆菌中表达的重组蛋白质缺少哺乳动物细胞特异的翻译后加工，所以，其生物活性无法与天然蛋白质相提并论。