ProQuest™ Two Hybrid System with GateWay™ Technology基于酵母，用于检测蛋白间相互作用。通过使用三种报告基因和低拷贝数的载体，ProQuest™系统可以得出最低假阳性的可信结果。另外，ProQuest™“诱饵”和“猎物”载体是GateWay™兼容的，使可能有相互作用的蛋白的下游表达和分析比以前更加方便

强大的技术

ProQuest™ Two Hybrid System是用于鉴定蛋白相互作用的一种有效工具。在ProQuest™系统中加入GateWay™技术，使您仅通过一个克隆步骤就可以在多个表达系统中表达可能的相互作用子蛋白，从而简化了下游的基因分析

ProQuest™工作原理

ProQuest™系统依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到“诱饵”载体，pDEST™ 32，并和GAL4蛋白的DNA结合域（DBD）表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到“猎物”载体，pDEST™ 22，同GAL4的转录激活域（AD）表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。

相互作用子蛋白的鉴定

用于ProQuest™系统的MaV203酵母宿主菌株含有报告基因，确保正确作用子蛋白的鉴定。酵母的基因组上整合有HIS3，VRA3和LacZ基因各自的单个拷贝。阳性作用子蛋白通过转化子在组氨酸和尿苷酸缺失培养基上的生长及X-gal对LacZ基因的诱导来鉴定。对URA3的诱导导致5-fluoroorotic acid（5FOA）转化为一种毒性化合物，5-fluorouracil。含有相互作用蛋白的细胞在缺乏尿苷酸的培养基中可以生长，但在含有5FOA的培养基中，细胞的生长就被抑制了。3种报告基因以及低拷贝数的诱饵和猎物载体，大大减少了假阳性，提供了稳定的结果。

GateWay™的威力

PDEST™ 32和pDEST™ 22载体是GateWay™兼容的，增加了ProQuest™系统的灵活性。一旦鉴定了相互作用子蛋白，您可以利用GateWay™介导的重组克隆快速方便地把目的序列在ProQuest™系统和其他表达分析工具之间穿梭移动（图1）。这使得您可以在其他宿主中表达目的蛋白以对蛋白的相互作用进行确认。

图1 使用ProQuest™ Two－Hybrid System with GateWay™ Technology

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