一、生物大分子色谱纯化方法的选择思路

通常在做纯化前对自己的目标物质特性了解越多对纯化将会越有利，如果不太了解，也可以通过电泳知道目标物质和杂质的情况，找到一种简单的鉴定方法，此外在纯化前必须先建立可靠的活性测定的方法。如果是未知的蛋白，那么通常可以有几种简单的摸索： 

1.凝胶过滤色谱。这个方法很常用，但是效率不高，对低浓度的样品没有富集作用，上样量小。

2.离子交换色谱。此法很常用，但是样品必须没有高浓度的盐。

      3.疏水色谱。此法较好，它分离效率高，上样量大，特别适合分离盐析沉淀的样品。

      4.亲和色谱。是最有效的手段，关键了解目标物质的特性以便选择合适的亲和色谱填料。

二、主要用途介绍

1. 去除内毒素

内毒素也叫热源，一般是磷脂A，糖类和蛋白，在中性条件下带有负电荷。内毒素的磷脂部分有很强的疏水性，一般的在高盐情况下它们会聚合，所以不能用疏水色谱，如果蛋白本身的疏水性强，可以选择把目标蛋白结合到疏水色谱填料（苯基琼脂糖凝胶FF，丁基琼脂糖凝胶FF）上

和内毒素分离。　　

内毒素因为带有很强负电荷，如果目标蛋白带阳电荷，用DEAE琼脂糖凝胶FF或Q琼脂糖凝胶FF把内毒素吸附，达到去除内毒素的目的。如果目标蛋白带阴电荷，可以尝试用阶段或梯度洗脱的方法把它们分离。
　　其中最有效而特异的方法是用亲和色谱填料去除内毒素，为此专门开发了两种专门去除内毒素的色谱填料，去内毒素琼脂糖凝胶FF和高效去内毒素琼脂糖凝胶FF可以很方便去除内毒素，其应用简单，效果明显，样品回收率高。方法是把适量的色谱填料加到样品中4度震荡40h左右无菌过滤就可以得到热源符合要求的样品，或者直接装柱然后循环上样8小时左右即可。

2. 去除核酸

大量的核酸会使样品的粘度增加，影响传质从而影响分离效果，此外在药品检验中也对核酸的含量有严格的规定，所以去除核酸非常重要。
　　核酸带有阴性的电荷，可用阴离子交换色谱填料DEAE琼脂糖凝胶FF或Q琼脂糖凝胶FF去除，也可用阳离子色谱填料：SP琼脂糖凝胶FF或CM琼脂糖凝胶FF直接把目标蛋白吸附而去除核酸。在2M硫酸铵的条件下，RNA和DNA都可以被苯基琼脂糖凝胶FF吸附。
　　此外也可以用核酸酶处理样品，把核酸降解成小片段，用凝胶过滤就可以去除。此外也可以本公司的DNA纯化琼脂糖凝胶FF去除。

3.      纯化硫酸铵沉淀样品

硫酸铵沉淀是很常用的初分离的手段，这样沉淀后的样品可直接用苯基琼脂糖凝胶FF或者是丁基琼脂糖凝胶FF分离，不用除盐，非常方便。疏水色谱已经得到大规模的推广和应用，是很好的纯化的手段。此外疏水色谱也可以用于天然产物的分离纯化，包括多肽、色素等各种物质的分离纯化，它的分离原理和反相色谱相同，但是不同于硅胶色谱填料的是它对样品几乎没有死吸附，所以回收率高。

4. 糖蛋白的纯化

偶联各种凝集素的琼脂糖凝胶FF的亲和色谱填料可以分离各种糖蛋白，例如Con A 琼脂糖凝胶 FF可以纯化糖基化的蛋白，或者膜组分，甚至细胞等物质。此外硼酸琼脂糖凝胶FF也用来分离各种

多糖和糖蛋白，其原理是苯硼酸类似于凝集素可以和各种糖基上的邻二羟基发生亲和作用。

5. 膜蛋白分离

有比较强的疏水性，可以用苯基或丁基琼脂糖凝胶FF疏水色谱分离，如果是有糖基结构或者受体等，也可以用亲和色谱的方法。

6. 纯化抗体和抗原

蛋白A琼脂糖凝胶FF可以用于分离纯化各种来源的抗体，包括抗血清、培养液以及腹水等样品。蛋白A可以特异吸附IgG的Fc区，所以它也适合分离酶解后的Fc片段，把Fab片段和Fc段分离。同时蛋白A琼脂糖凝胶FF也可用于血清中IgG的分离，得到不含抗体的血清，蛋白A琼脂糖凝胶FF有很好的稳定性，能耐受37度3-5天而对柱子的性能没有影响，是分离抗体的最佳选择。
    疏水色谱色谱填料苯基琼脂糖凝胶FF以及DEAE琼脂糖凝胶FF也场用于抗体的分离，只是特异性不如重组蛋白A琼脂糖凝胶FF好。
纯化IgG抗原最有效的办法是免疫亲和，具体的方法是把抗抗原的IgG直接偶联到环氧活化琼脂糖凝胶FF上，然后直接高pH吸附，低pH洗脱就可以得到需要的抗原。
　　对于高亲和力的抗体筛选，特别是小分子的半抗原，我们建议可以把半抗原偶联到环氧活化琼脂糖凝胶FF，把只和抗原结合的IgG分离，得到高亲和力的抗体，非常方便和实用，此外也可以选择氨基化琼脂糖凝胶FF或羧基化化琼脂糖凝胶FF偶联半抗原，特别是对那些不适合用环氧活化琼脂糖凝胶FF偶联的半抗原。如果要偶联的是小分子的物质，需要用11个碳原子亲和手臂的活化好的填料，这样才能克服空间位阻得到最佳分离效果，如果是大分子的物质，那最好用3个碳原子亲和手臂的活化好填料就可以，这样栽量高，效果好。
　　IgM和IgY可用吡啶琼脂糖凝胶FF亲和的方法把它们和杂蛋白分离。

7. 纯化重组蛋白

重组蛋白构建已经考虑到纯化的问题，大大简化了纯化的步骤，但还是会遇到些实际的问题，所以需要详细阅读使用说明和注意事项。
　　(一) HIS标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF分离，色谱填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，吸附载量更高，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的最佳工具。
　　(二) ST融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s转酶，很方便用GST琼脂糖凝胶FF分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF或苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离。
　　(三) 白A融合蛋白可以用IgG琼脂糖凝胶FF分离。
　　(四) 涵体蛋白的色谱复性: 离子交换和疏水色谱都在包涵体复性中有很好的效果，金属螯合色谱填料等亲和色谱填料也常用于带HIS标签融合蛋白的色谱复性。

8.    疫苗的纯化

疫苗可以用琼脂糖凝胶FF分离。

9.    DNA疫苗的纯化

DNA疫苗要求超螺旋DNA含量大于90%，用DNA纯化琼脂糖凝胶FF就可以专门用于各种结构的DNA的分离，一步色谱后超螺旋含量可大于90%。同时配合琼脂糖凝胶FF可以去除RNA，再用去内毒素色谱填料去除内毒素就可做到临床级别的DNA疫苗。其工艺简单、成熟。

10. 磷酸化蛋白和肽纯化

合琼脂糖凝胶FF螯合铁离子，可以特异吸附磷酸化的肽和蛋白，所以是分离这类物质最好的工具。

11. 血清白蛋白的去除

琼脂糖凝胶FF可以用于分离各种激酶或依赖核苷酸为辅酶的酶，它能特异性的和白蛋白结合，所以用它去除样品中的血清蛋白的干扰，使样品更好纯化。
    金属螯合琼脂糖凝胶FF也可以和白蛋白结合，载量为16mg/ml。

 12. DNA结合蛋白的纯化

用DNA琼脂糖凝胶可以专门纯化和DNA结合的蛋白。

三、产品购买信息

     主要产品如下：

1.       凝胶过滤色谱填料

2.       离子交换色谱填料  

3.       疏水色谱填料  

4.       去内毒素填料

5.       亲和色谱填料

6.       活化色谱填料

7.       亲和重力柱（液体依靠重力流动，不需要特殊输液设备）

8.       常用进口填料装填预装柱

9.       色谱柱(不耐压柱)

10.   中压玻璃色谱柱带夹套（带转换接头）柱内耐压0.5-0.7MPa。