(2)  佐剂 (adjuvant)
¨  一般可溶性抗原注射后，迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长潴留时间，且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中，常将抗原和佐剂一起注射。
¨  最常用的佐剂是弗氏佐剂，又分为:
–   弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant)
–   弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant)
弗氏不完全佐剂
(Freund’s incomplete adjuvant, FIA)
¨  是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成，比例为1:1、2:1、3:1或5:1，可根据需要而定，通常2:1。
¨  使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。
弗氏完全佐剂 (Freund’s complete adjuvant, FCA)
¨  在弗氏不完全佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2～20mg/ml)，即成为FCA。
¨  免疫动物时，将弗氏佐剂与抗原按体积 1:1 混合乳化后(油包水)注入动物。
–   一般首次注射时用完全佐剂乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
佐剂与抗原乳化的方法
¨  研磨法：适于制备大量的佐剂抗原
–    先将不完全佐剂加热，取1.73ml放人无菌玻璃研钵内；缓缓滴入0.23ml活卡介苗，边滴边按同一方向研磨，使菌体完全分散。
–    按同样方法滴人抗原，每加一滴应研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人后，应成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
¨   缺点：研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大，对微量或难得抗原不宜采用。
佐剂与抗原乳化的方法(续)
¨  注射器混合法
–   将等量的完全佐剂和抗原分别吸人两个5ml注射器内，然后插入三通管内，交替推动针管混匀，往复操作直至形成粘稠的乳剂为止。
¨  优点：无菌操作，节省抗原或佐剂。
¨  缺点：不易乳化，时间长。
佐剂与抗原乳化的方法(续)
¨  快速乳化法：利用超声波粉碎器可快速乳化抗原和佐剂混合物。
–   将抗原和佐剂按所需量加入一离心管中，置于超声波粉碎器上，粉碎头浸入液面下 0.5cm，离瓶底0.5cm左右，以免打碎离心管。
–   每次乳化 10～15s，然后置冰箱lmin左右。反复乳化3～4次即可完全乳化。管内残余量800r/min离心5～10min收集。
¨  优点：简单、快速、节省材料。
乳化剂的鉴定
¨   判断乳化是否充分，可将一滴乳化好的液体滴在水面上(冷水中)，如能长时间保持圆珠形而不散开，表示乳化达到要求。
(3)  免疫方法——免疫途径
¨  常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内、淋巴结、脚掌等注射。
¨  一般采用多点注射方法
–   常在足、掌、腋窝淋巴结周围、背部两侧、颌下、耳后等处的皮内或皮下。
–   皮内易引起细胞免疫反应，有利于提高抗体的效价。
(3)  免疫方法——免疫途径 (续)
¨  几点说明：
–   大动物一般不用腹腔注射
–   颗粒抗原和使用佐剂时不能静脉注射
–   抗原宝贵可采用淋巴结内微量注射法，只需10～100mg抗原即可获得较好的免疫效果。
–   皮内注射较困难，特别是天冷时更难注入。 
(3)  免疫方法——次数及间隔时间
¨  次数一般为2～3次(初次免疫和加强免疫)
–   首次注射后，10～15天再加强注射；
–   剂量同首次或为首次的一半，用不全佐剂或不用佐剂。
¨  间隔时间，一般而言，动物越大，间隔越长
–   豚鼠、大鼠为7～8天，兔子为10～15天，羊为14～28天；
–   第三次注射的间隔时间更长些，效果更好。