1、微载体悬浮培养细胞的病毒生产工艺

作者选VSV病毒来接种经微载体培养的敏感细胞，病毒的效价测定用A549细胞（也可用Wish或Hep-2细胞或鸡胚纤维母细胞测TCID₅₀），病毒的效价为6 Log TCID₅₀/m L，用鸡胚细胞空斑法测定一般为10⁷Pfu/mL。

①VSV在方瓶贴壁细胞中的增殖（100mL方瓶，10mL培养基）待BHK21、BHK13、CHO-K₁细胞长满单层，弃上清加入10^-2VSV病毒悬液0.2ml，37℃吸附1小时，加病毒维持液培养20小时，于-30℃冻存，待测效价。

②VSV在微载体悬液培养的细胞中增殖。

微载体培养的BHK21或BHK13、或CHO-K₁细胞，

3～4天后细胞密度已达1×10⁶细胞/mL

静置30分钟

尽量吸去原培养基

37℃

将10^-2VSV病毒按50mL培养体积加入1mL病毒液于微载体细胞中

37℃ 50r/min搅拌5分钟

静置吸附1小时（每20分钟搅拌2分钟）

加入病毒维持液至原体积

37℃继续搅拌培养20小时

于-30℃冻融后

2000 r/min 低温离心10分钟

收集上清，即为VSV增殖的病毒液，分装冻存，待测效价

结果，在微载体悬浮培养的三株细胞所繁殖VSV病毒不仅产量大，而且病毒效价平均高1LogTCID₅₀，尤以CHO-K₁效价最高，平均可达7.75logTCID₅₀比原先的毒种效价还要高1.75LogTCID₅₀，又起到了提高病毒效价的作用。

此方法也可应用于生产病毒疫苗，只要疫苗株病毒的敏感细胞能在微载体上大量生产。若疫苗株是减毒活疫苗株，此法生产的病毒可直接制备活疫苗。若疫苗株为非减毒活疫苗株，此法生产的病毒可用甲醛灭活法制备死疫苗。

2、转瓶培养法

此法是目前各大生物制品研究所常用于生产疫毒疫苗的方法，如生产脊髓灰质炎病毒疫苗，麻疹疫苗等。

将细胞制备成悬液后，在温室内（37℃）使支架以8～12转/小时缓慢转动，以使细胞贴壁，当加入病毒后，待细胞出现+++以上细胞病理性改变(CPE)时，标志病毒已大量繁殖，此时收获病毒，按生物制品程序加工成疫苗。

3、罗式瓶培养

将许多大罗氏瓶，在净化室内，把制备好的细胞悬液人工加入瓶内，100mL/瓶，在温室内的货架上一排排放置，进行静置贴壁培养，待细胞呈单层后，倒去旧液，加含病毒疫苗株和维持液，继续静置培养，每天观察细胞和记录温室的温度，待细胞有明显的CPE产生时，收获病毒液，然后按疫苗生产加工工艺制成疫苗。

以上2、3两种方法是我国各大生物制品所常规方法，由于制品工艺的要求，目前仍然采用，但正在不断改进和采用新工艺、新方法和高技术来生产疫苗.