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[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

二、显色液
1. DAB (Diaminobenzidine) 显色液
  DAB(3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐)  50mg 
  0.05MTB(或0.01MPBS)              100ml
  30%H2O2                          30~40μl
   配制方法:先以少量0.05MTB(或0.01MPBS)溶解DAB,充分溶解后加入剩余的TB或PBS,摇匀后(避光)过滤,显色前加入30% H2O2,宁少勿多,便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。
  DAB有致癌作用,操作时应格外小心,避免直接与皮肤接触,用后的器皿应充分冲洗,用后的DAB液不应冲入下水道,应集中深埋或清洁液处理后弃之。
2. AEC(3-amino-9-ethylcarbozloe)显色液
  AEC(3-氨基- 9-乙基卡巴唑)      20 mg
  二甲酰胺(DMF)                2.5 ml
  0.05M醋酸缓冲液(PH5.5)        50 ml
  30% H2O                       25μl
   配制方法:先将AEC溶于DMF中,再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30% H2O2液。镜下控制显色时间。阳性为深红色颗粒。
3. 4-氯-1萘酚(4-CL-1-NapHthol)显色液
  4-氯-1萘酚                       100 mg
  无水乙醇                         10 ml
  0.05MTB(PH7.6)                190ml
  30% H2O                                  10μl
   配制方法:先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中,然后再加入TB190ml,用前加入30%H2O2,显色时间5~20分钟。阳性结果为蓝或深蓝色。
4. α-萘酚显色液(1)
 α-萘酚AS-BI磷酸盐                  1mg
 坚固红TR盐                         2mg
 底物缓冲液                           2ml
 二甲基甲酰胺(DMF)                 40μl
配制方法:先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μl DMF中,再加入底物缓冲液2l,临用前10分钟加坚固红TR盐。
 底物缓冲液(PH8.2~8.3)
  0.2M Tris                            50ml
  0.1M HCL                           40ml
  Mg2CL·6 H2O                        20.3mg
  左旋咪唑                            20.4mg
  双蒸水 加至                         100ml
结果为玫瑰红色,若在底物显色液中用坚固兰BB盐代替坚固红TR盐,终产物为深蓝色。
5. α-萘酚显色液(2)
 α-萘酚AS-BI磷酸盐                    5mg
 DMF                                   0.05ml
 丙二醇缓冲液(0.05M,PH9.8)           5ml
 坚牢蓝 BB                              2mg
配制方法:先将α-萘酚溶于DMF中,然后加入丙二醇缓冲液,临用前加入坚牢蓝BB,溶解过滤后使用。
丙二醇缓冲液(储备液)
 2mol/L:
 2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇                   35.64g
 6mol/L HCL                              32ml
 0.005M MgCL2                            4ml
 左旋咪唑                                 480mg
 双蒸水  加至                             200ml
 用HCL或NaOH调PH至9.8。
取上述储备液1ml用双蒸水稀释至40ml备用。
阳性结果为蓝色颗粒。

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