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二、显色液 1. DAB (Diaminobenzidine) 显色液 DAB(3.3—二氨基联苯胺四盐酸盐) 50mg 0.05MTB(或0.01MPBS) 100ml 30%H2O2 30~40μl 配制方法:先以少量0.05MTB(或0.01MPBS)溶解DAB,充分溶解后加入剩余的TB或PBS,摇匀后(避光)过滤,显色前加入30% H2O2,宁少勿多,便于掌握反应过程。阳性为棕黄色颗粒。 DAB有致癌作用,操作时应格外小心,避免直接与皮肤接触,用后的器皿应充分冲洗,用后的DAB液不应冲入下水道,应集中深埋或清洁液处理后弃之。 2. AEC(3-amino-9-ethylcarbozloe)显色液 AEC(3-氨基- 9-乙基卡巴唑) 20 mg 二甲酰胺(DMF) 2.5 ml 0.05M醋酸缓冲液(PH5.5) 50 ml 30% H2O2 25μl 配制方法:先将AEC溶于DMF中,再加入醋酸缓冲液充分混匀。临显色前加入30% H2O2液。镜下控制显色时间。阳性为深红色颗粒。 3. 4-氯-1萘酚(4-CL-1-NapHthol)显色液 4-氯-1萘酚 100 mg 无水乙醇 10 ml 0.05MTB(PH7.6) 190ml 30% H2O2 10μl 配制方法:先将4-氯-1萘酚溶于无水乙醇中,然后再加入TB190ml,用前加入30%H2O2,显色时间5~20分钟。阳性结果为蓝或深蓝色。 4. α-萘酚显色液(1) α-萘酚AS-BI磷酸盐 1mg 坚固红TR盐 2mg 底物缓冲液 2ml 二甲基甲酰胺(DMF) 40μl 配制方法:先将α-萘酚AS-BI磷酸盐溶于40μl DMF中,再加入底物缓冲液2l,临用前10分钟加坚固红TR盐。 底物缓冲液(PH8.2~8.3) 0.2M Tris 50ml 0.1M HCL 40ml Mg2CL·6 H2O 20.3mg 左旋咪唑 20.4mg 双蒸水 加至 100ml 结果为玫瑰红色,若在底物显色液中用坚固兰BB盐代替坚固红TR盐,终产物为深蓝色。 5. α-萘酚显色液(2) α-萘酚AS-BI磷酸盐 5mg DMF 0.05ml 丙二醇缓冲液(0.05M,PH9.8) 5ml 坚牢蓝 BB 2mg 配制方法:先将α-萘酚溶于DMF中,然后加入丙二醇缓冲液,临用前加入坚牢蓝BB,溶解过滤后使用。 丙二醇缓冲液(储备液) 2mol/L: 2-氨基-2-甲基-1.3丙二醇 35.64g 6mol/L HCL 32ml 0.005M MgCL2 4ml 左旋咪唑 480mg 双蒸水 加至 200ml 用HCL或NaOH调PH至9.8。 取上述储备液1ml用双蒸水稀释至40ml备用。 阳性结果为蓝色颗粒。
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