（四）注意事项
1．每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。
2．加抗原前必须摇匀。
3．反应温度最好保证在30℃左右，3min～5min内判定。如反应温度偏低，可适当延
长判读时间。
4．如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集反应时，则需要用四个血清量重检。
5．平板凝集反应最好是用于初筛，如出现阳性或可疑反应，再用试管凝集反应进行复检，以定性。
6．平板凝集反应与试管凝集反应的关系 见表4-1。
表4-1 平板凝集反应与试管凝集反应的关系
四、试管凝集反应
（一）材料与试剂
以布氏杆菌病试管凝集反应为例。
1.试管（1cm×8cm）、试管架、恒温箱、吸管等。
2.布氏杆菌病标准阳性血清、标准阴性血清、布氏杆菌试管凝集用抗原。
3.布氏杆菌病待检血清。
4.0.5%石炭酸生理盐水。
（二）操作方法
1.试管4支，另取对照管3支，共7支试管，置于试管架上。如检多份血清，则对照只需做一份。
2.按表4-1加入0.5%石炭酸生理盐水，另用1ml的刻度吸管吸取0.2ml待检血清加入第一试管中。反复吹吸5次混匀。
3.以第1试管中吸取1.50ml弃之，再吸取0.50ml加入第2试管中，第1试管尚剩0.50ml。按第1管的办法吹吸混匀第2管，再从第2管吸取0.50ml放入第3管，以此类推，将第4管混匀后，弃去0.50ml。第5管只加0.5%石炭酸生理盐水0.50ml，第6管加1︰25稀释的布氏杆菌病标准阳性血清，第7管加1︰25稀释的布氏杆菌病标准阴性血清0.50ml。
4.将购买的布氏杆菌凝集抗原以0.5%石炭酸生理盐水做1︰20稀释，使每ml含菌为8亿，每管加0.50ml。
5.全部加毕后，一起振摇，混匀，放入37℃度温箱12h～14h，取出后至室温2h～4h，观察并记录结果。
（三）结果判定
结果用“+”表示反应强度。
++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。
+++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。
++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。
+ ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。
— ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。
以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物（马，牛，骆驼等）以凝集价1︰100以上判为阳性，1︰50的凝集价判为可疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1︰50以上判为阳性，1︰25的凝集价判为可疑。
如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。
（四）注意事项
1.结果为可疑时，隔2～3周后采血重做。阳性畜群，重检时仍为可疑，可判阳性。对同群中既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重检仍为可疑者，判阴性，牛、羊血清重检仍为可疑者，可判为阳性，或以补反等核对。
2.对阴性畜群，初检为可疑，复检仍为可疑（即效价不升高者），为慎重起见，可进行补反或细菌分离，如补反和细菌分离均为阴性者，可判为阴性。
3.化验结果通知畜主时，必须注明凝集价。
4.凝集反应用的血清必须新鲜，过度溶血的血清也不好。用0.5%石炭酸防腐的血清，也最好在15日内检测完。
5.在试管凝集反应中，抗原抗体的比例是非常重要的，必须进行摸索，特别是在新建立一项试管凝集反应时，如抗体比例过大，即稀释倍数较小，可出现假阴性现象，即在“++++”的前几管可出现“—”或低于“++++”的反应强度，这种现象就叫前带现象。如进行马流产伤寒沙门氏血清试管凝集反应时，就可能出现这种前带现象。
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