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琼脂平板电泳
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-10-31|  字体: [ ]  

琼脂凝胶结构均匀,含水量大,吸附量小,因此电泳速度快,电泳结果区带整齐,分辨率高,易染色,制成薄膜标本保存方便。所以琼脂凝胶电泳最常用。

(一)试剂及材料
1.pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液
2.优质琼脂
3.玻板、打孔器等

(二)操作方法
1.以巴比妥缓冲液配成1%~1.5%琼脂,溶化后制成2mm~3mm的琼脂板。
2.打孔  在玻片的1/3处打孔,孔径3mm~6mm。也可用剃须刀片挖一小槽。
3.加样  将血清样品直接加入孔内,如非血清样品则尽可能用pH7.4PBS透析后加样。
也可以不打孔,用滤纸片蘸取样品直接插入以小刀划开的琼脂裂缝中。
4.电泳  将样品端放入负极,用滤纸(纱布、棉布均可)2~3层搭桥(与玻片同宽度),电压3V/cm~6V/cm,电流强度1.5mA/cm~3mA/cm。
5.断电  电泳2h~4h,断电。
6.固定、染色、观察结果。 
  


    (三)注意事项
1.为了观察泳动情况,以掌握断电时间,可在加样的同时,加一滴伊文斯兰染色液即可。
2.开始电泳时,电压要小一些,以逐渐升至所需要得强度。
1.  为了获得较好的区带结果,采用较小的电压(或电流),适当延长时间是可取的。

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