(四)结果判定 在对照完全成立的情况下,判定本试验结果: “++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明。 “+++” :炭粉大部分凝集,液体透明。 “++” :炭粉一半凝集,液体较透明。 “+” :炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊。 “—” :炭粉不凝集,液体不透明。 炭凝以“++”做为反应滴度的终点。 三、反向间接乳胶凝集反应 (一)原理 同炭凝,只是载体换为聚苯乙烯乳胶,它是一种由0.6μm~0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液,具有良好的吸附蛋白质的性能。 间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。 (二)材料与试剂 1.聚苯乙烯乳胶 2.免疫血清 3.正常血清 4.标准抗原 5.待检抗原 6.0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液 硼砂 6.67g 硼酸 8.04g H2O 加至 1 000ml 7.生理盐水 (三)操作方法 1.乳胶液制备 取聚苯乙烯乳胶0.10ml,加灭菌蒸馏水0.40ml,再加pH8.2硼酸缓冲液2ml,混合后即为25倍稀释的乳胶液。 2.乳胶致敏 在上述乳胶液中滴加稀释的免疫血清0.20ml~0.70ml,边加边摇,当出现肉眼可见的颗粒后,仍继续加血清,直至颗粒消失,成为均匀的乳胶悬液为止。镜下检查应无自凝。使用时,应与一定稀释度的相应抗原出现阳性反应,与生理盐水出现阴性反应为合格。加防腐剂后,于冰箱内保存。注意防止冰冻。 同时以正常血清代替免疫血清进行乳胶致敏,以作对照。 3.取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成小格,滴加待检样品0.10ml,再滴加高免血清致敏乳胶0.01ml,以牙签或火柴杆混匀,在3min内判定结果。 (四)结果判定 “++++”:全部乳胶凝集,成絮状团块,液体清亮。 “+++” : 大部分乳胶凝集成较小的颗粒,液体清亮。 “++” : 半量乳胶凝集成细小颗粒,液体混浊。 “+” : 较少量的乳胶凝集成可见的细颗粒,液体混浊。 “-” : 全部乳胶仍为均匀液体,无颗粒。 以“++”作为该反应滴度的终点。 四、 间接红血球凝集反应 间接红血球凝集反应(简称间接血凝)是间接凝集反应中应用最广的一种方法。 (一)原理 以红血球为载体的间接凝集反应叫做间接血凝。将抗原吸附在红血球上用以检测微量抗体称为正向间接血凝,以抗体吸附于红血球上,检测相应的抗原,称为反向间接血凝。 用抗原吸附红血球,一般比较容易,但用免疫血清吸附红血球,则困难得多,而且往往不易获得良好的结果,因为免疫血清中的成分非常复杂。许多其他蛋白质和非抗体活性的免疫球蛋白占据红血球的表面,而影响血球的特异性凝集。
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