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[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-10-31|  字体: [ ]  

一.卵白素和生物素免疫组织化学染色
1.标记卵白素—生物素(LAB)技术
(1)石蜡切片常规脱腊入水。
(2)0.3%H2O2—甲醇10分钟,水洗。
(3)PBS洗3次。
(4)加生物素(Biotin)标记的特异性一抗,37。C30分钟,置湿盒内。
(5)PBS洗3次。
(6)加酶标记的卵白素(Avidin), 37。C30分钟。
(7)PBS洗3次。
(8)DAB显色。
(9)流水冲洗,复染、脱水、封片。
2.桥式卵白素-生物素(BRAB)技术
(1)同LAB技术(1)--(5)
(2)加卵白素(Acidin)37。C30分钟。
(3)PBS洗3次。
(4)加酶标记的生物素(Biotin), 37。C30分钟。
(5)同LAB技术(7)--(9)
3.卵白素—生物素---过氧化物酶复合物(ABC)技术(三步法)
(1)同LAB技术(1)--(2)
(2)必要时胰酶消化,37。C30分钟。
(3)蒸馏水洗,PBS洗2次。
(4)正常羊血清(1:5-10)室温,10-20分钟。
(5)特异性抗体适当稀释,置湿盒中37。C60分钟或4。C过夜。
(6)PBS洗3次。
(7)生物素化(Biotin)第二抗体,37。C20分钟。
(8)PBS洗3次。
(9)ABC试剂,37。C30分钟,置湿盒中。
临用前将试剂A与试剂B等量混合,稀释为1:100的浓度,滴加于切片上。
(10)PBS洗3次。
(11)同LAB技术(7)--(9)
4.ABC快速法
在大量标本染色或快速切片的免疫组化染色时,可采用ABC快速染色法。
(1)同LAB技术(1)--(3)
(2)PBS洗3次。
(3)用含4%BSA和1%正常血清的PBS作用2分钟。
(4)特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液孵育15分钟。
(5)PBS洗3次。
(6)同LAB技术(8)--(9)
特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液的配制:于染色前30分钟用等体积的生物素化IgG—ABC混合,然后加入经适当稀释的特异性抗体。

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