原理

混合型玫瑰花环的方法是既应用补体致敏的家鸽红细胞（PRBC）作为B—细胞的标志，同时又应用绵羊红细胞（SRBC）作为T—细胞的标志，在一张玻片上同时检测T、B淋巴细胞。

操作方法

1．鸽翼下静脉采血，加等量阿氏液，保存于4℃，可用2周。

2．以Hank’s液洗鸽红细胞3次，最后配成5％PRBC悬液。

3．取5％PRBC0.25ml，加溶血素（兔抗鸽红细胞抗体，亚凝集单位）0.25ml于37℃水浴30min。以Hank’s液洗涤3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

4．加1％SRBC悬液0.25ml，37℃水浴30min，Hank’s液洗涤3次，去上清，加Hank’s液0.25ml。

5．加淋巴细胞悬液0.25ml（2×106～4×106个细胞／ml），37℃水浴5min，500r/min离心3min，置4℃过夜。

6．取出迅速加入20％甲醛溶液0.5ml，混匀，于4℃放置10min后，加2滴2％美兰液，轻轻摇匀。

7．取1滴于载玻片，加盖玻片，置镜下观察。计数300个淋巴细胞。

结果判定

一个淋巴细胞吸附有3个以上的PRBC为PRBC玫瑰花细胞，即为B细胞。

一个淋巴细胞周围吸附有3个以上SRBC为SRBC玫瑰花细胞，即为T细胞。

一个淋巴细胞周围附有2个以上PRBC和3个以上SRBC为双相玫瑰花细胞，即为D淋巴细胞。

既无PRBC又无SRBC附着的淋巴细胞为N淋巴细胞，即为无标记淋巴细胞。

D淋巴细胞与N淋巴细胞是极少数的。

计数300个淋巴细胞，分别计数PRBC、SRBC玫瑰花细胞和双相玫瑰花细胞的形成率。