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白细胞介素2(IL-2)的生物学活性测定
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

(一) 原理
  IL-2主要由活化T细胞产生,又为T细胞增殖所必需,故称T细胞生长因子( T Cell Growth factor, TCGF )。IL-2产生的水平反映T细胞的功能,牪;仅是免疫调节重要的研究对象,而且与临床多种疾病密切相关,CTLL是C57BL/6来源的。犘!鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系,由Gills 1977年建立,只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外,丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞
  (二) 方法
  可根据实验室条件,选用3H-TdR掺入法和MTT法
  1. 3H-TdR掺入法
        IL-2依赖的CTLL用10%FCS RPMI1640洗涤
        2次,每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的IL-2
                  ↓
             调整活细胞数1×105/ml
                  ↓
           96孔平底培养板中每孔加100μl
           CTLL悬液(1×104/孔)
                ↓
          加入不同稀释度标准IL-2和待测样品
                  ↓
         37℃CO?孵箱,培养18~24h
                  ↓
         每孔加3H-TdR 0.5μci/50μl
                  ↓ 4-6h
         用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上
                  ↓
         干燥后,移入液闪瓶中,加入1ml闪烁液,
         于液闪仪中测β射线的cpm值
                  ↓
  计算(举例)
  将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图,犠]轴采用概率座标(probit),横座标为Log2稀释倍数。从50%的最高cpm值画一横线,犛k标准和待检斜线的交点,即可计算出待检样品IL-2的活性单位。
  如标准品50%最大cpm值时为1u/ml,则待测标本1∶4时为1u/ml,原液则为4μ/ml

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