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[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

4. Tris Buffered saline (TBS) 0.05M, PH7.6
1份 Tris---HCl buffer 0.5M PH7.6
9份 0.15M NaCl
Tris buffer 0.5M PH7.6
Tris 60.6g 溶于1000ml蒸馏水,用HCl调PH至7.6
5. Tris buffer HP8.2 0.1M
Tris 12.12g 溶于1000ml蒸馏水,HCl调PH8.2

  (四) 注意事项
  1. 细胞表面抗原的强度以新鲜分离细胞制片、固定为好。若需保存最好干燥密封贮存于-20℃低温冰箱中,使用前必须充分干燥后固定。
  2. APAAP中碱性磷酸酶和抗碱性磷酸酶的比例非常重要,抗体浓度过高,易封闭桥抗影响染色结果。
  3. 一抗、桥抗和APAAP复合物使用的浓度视细胞表面抗原密度而定,每步洗涤要充分。
           常用McAb主要检测细胞和百分率(举例)
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
CD 主要检测细胞    淋巴细胞中百分率(X±SD)  代表抗体
───────────────────────────────────
CD1  胸腺细胞           0          Leu6, OKT6, T6
CD2 E受体阳性细胞       83±5 Leu5b, OKT11, T11,9.6
CD3 T细胞           75±7 Leu4, OKT3
CD4 辅助细胞/诱导T细胞    45±10 Leu3a, OKT4
CD5 T细胞           72±7 Leu1, OKT1, T1
CD7 T、NK细胞         75(>95% of T-ALLs) Leu9, 3A1
CD8 杀伤性T细胞/抑制性T细胞 28±9 Leu2a,2b,OKT8,OKT5,T8
CD10 普通急性淋巴母细胞白血病 >90% of common ALLs  acALLA, J5
CD11 Ts、NK、Mo、粒细胞    30±5 Leu15,OKM1,Mol
CD15 Mo、粒细胞        >95%成熟粒细胞
                80~100%Mo LeuM1, My1
CD16 NK和中性粒(IgG FCR) 15±7 Leu11a, b, c
CD19 B 10±5 Leu12, B4
CD20 B 10±5 Leu16, B1
CD21 B(成熟)          5々~ acR2, B2
CD22 B 10±5 Leu14,
CD25 活化T,NK,HTLV感染
   T细胞白血病细胞     100%母细胞       αIL~2R,Tac
CD38 胸腺细胞,NK,活化T、
   B亚群          34±10 Leu17, OKT10
CD56 NK, TC 15±6 Leu19, NKH-1
CD57 NK, T亚群        20±7 Leu7, HNK-1
CD71 淋巴母细胞、肿瘤细胞、Mo 100%淋巴细胞,     dTr fR, OKT9
─ B、Mo、Mφ、活化T   11±4 αHLA-DR, OKIa

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