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间接凝集反应技术(Indirect agglutination reaction technique)
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

(四)结果判定
在对照完全成立的情况下,判定本试验结果:
“++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明。
“+++” :炭粉大部分凝集,液体透明。
“++”   :炭粉一半凝集,液体较透明。
“+”     :炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊。
“—”     :炭粉不凝集,液体不透明。
炭凝以“++”做为反应滴度的终点。 
  
三、反向间接乳胶凝集反应
 
(一)原理
同炭凝,只是载体换为聚苯乙烯乳胶,它是一种由0.6μm~0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液,具有良好的吸附蛋白质的性能。
间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。
(二)材料与试剂
1.聚苯乙烯乳胶
2.免疫血清
3.正常血清
4.标准抗原
5.待检抗原
6.0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液
硼砂                 6.67g
硼酸                 8.04g
H2O          加至  1 000ml
    7.生理盐水
(三)操作方法
1.乳胶液制备  取聚苯乙烯乳胶0.10ml,加灭菌蒸馏水0.40ml,再加pH8.2硼酸缓冲液2ml,混合后即为25倍稀释的乳胶液。
2.乳胶致敏  在上述乳胶液中滴加稀释的免疫血清0.20ml~0.70ml,边加边摇,当出现肉眼可见的颗粒后,仍继续加血清,直至颗粒消失,成为均匀的乳胶悬液为止。镜下检查应无自凝。使用时,应与一定稀释度的相应抗原出现阳性反应,与生理盐水出现阴性反应为合格。加防腐剂后,于冰箱内保存。注意防止冰冻。
同时以正常血清代替免疫血清进行乳胶致敏,以作对照。
3.取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成小格,滴加待检样品0.10ml,再滴加高免血清致敏乳胶0.01ml,以牙签或火柴杆混匀,在3min内判定结果。
(四)结果判定
    “++++”:全部乳胶凝集,成絮状团块,液体清亮。
    “+++” :  大部分乳胶凝集成较小的颗粒,液体清亮。
    “++”   :    半量乳胶凝集成细小颗粒,液体混浊。
    “+”     :      较少量的乳胶凝集成可见的细颗粒,液体混浊。
    “-”     :      全部乳胶仍为均匀液体,无颗粒。
    以“++”作为该反应滴度的终点。 
  
四、 间接红血球凝集反应
 
间接红血球凝集反应(简称间接血凝)是间接凝集反应中应用最广的一种方法。
(一)原理
以红血球为载体的间接凝集反应叫做间接血凝。将抗原吸附在红血球上用以检测微量抗体称为正向间接血凝,以抗体吸附于红血球上,检测相应的抗原,称为反向间接血凝。
用抗原吸附红血球,一般比较容易,但用免疫血清吸附红血球,则困难得多,而且往往不易获得良好的结果,因为免疫血清中的成分非常复杂。许多其他蛋白质和非抗体活性的免疫球蛋白占据红血球的表面,而影响血球的特异性凝集。

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