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间接凝集反应技术(Indirect agglutination reaction technique)
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

一、概述
 
(一)原理
可溶性抗原(或抗体)吸附于免疫学反应无关的颗粒(称为载体)表面上,当这些致敏的颗粒与相应的抗体(或抗原)相遇时,就会产生特异性的结合,在电解质参与下,这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应。
载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。间接凝集反应的优点为:①敏感性强:间接凝集反应是最敏感性的血清学反应方法之一,可以检测到微量的抗体和抗原;②快速: 一般1h~2h即可判定结果,若在玻板上进行,则只需几分钟;③特异性强;④使用方便、简单。
(二)载体
具有吸附抗原(或抗体)的载体很多,如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。
良好载体有如下几点基本要求:①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向;②大小均匀;③比重与介质相似,短时间内不能沉淀;④无化学或血清学活性;⑤吸附抗原(或抗体)后,不影响其活性。
目前应用最广的是人的O型红血球和绵羊红血球。而后者应用更广,因为其来源方便。另外绵羊红血球的表面有大量的(约1 000个以上)糖蛋白受体,极易吸附某些抗原物质,吸附性能好,且大小均匀一致。
(三)间接凝集的分类
1.根据载体的不同,可分为间接炭凝、间接乳胶凝集和间接血凝等。
    2.根据吸附物不同可分为间接凝集反应(吸附抗原)和反向间接凝集反应(吸附抗体)。
    3.根据反应目的不同,又可分为间接凝集抑制反应和反向间接凝集抑制反应。

4.根据用量和器材的不同又可分为试管法(全量法)、凹窝板法(半微量法)和反应板法(微量法)。 
 
二、间接炭凝反应
 
(一)原理
    间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生特异性结合,形成肉眼可见的炭微粒凝集块。
目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。
(二)材料与试剂
    1.炭粉  炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市场上出售的炭粉均不合要求,必须过300目/寸的标准筛以300r/min离心去沉淀,再以3 000r/min离心去上清,收集沉淀物。
    2.高免血清
    3.待测标本
    4.灭活兔血清
    5.正常血清
    6.标准抗原
    7.0.05mol/L pH7.2PBS液
    8.1%硼酸的PBS液
(三)操作方法
    1.炭致敏  取湿炭粉0.25g(干粉0.10g),加入经56℃~60℃灭活30min的稀释高免血清3ml,充分摇匀,置37℃致敏30min,不时摇动,取出后用pH 7.2 PBS液洗涤3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗涤一次,离心去上清,再取此液3ml,混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照。
致敏血清(加1/万硫柳汞防腐)于室温或4℃冰箱中保存,一年内有效。
    2.取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混匀,静止1min~5min,判定结果。同时设三个对照:
⑴免疫炭血清+标准抗原。
⑵正常炭血清+标准抗原。
⑶正常炭血清加待检抗原。

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