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经典补体结合反应(以马鼻疽补反为例)
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2006-11-01|  字体: [ ]  

(一)预备试验
1.绵羊红细胞悬浮液的制备  通常用公绵羊红细胞,将绵羊血液采集于带有玻璃珠的无菌容器中,充分振摇,使脱去纤维,此时血液失去凝固性,称脱纤血。
亦可用阿氏液保存血液,阿氏液配方如下:
    葡萄糖                        24.60g
    氯化钠                        5.04g
    柠檬酸钠(含2个分子结晶水)   9.60g
    蒸馏水                       1 200ml
溶液配好后,高压(10磅)灭菌10min,也可通过蔡氏滤器灭菌。溶液盛于瓶内,将绵羊血直接采入瓶内,血量应大致与阿氏液量相等。摇匀,置冰箱中保存,可保存3周左右。
用时将血液移入离心管内,加3~5倍量生理盐水,离心沉淀洗涤三次,每次2 000r/min,离心10min,然后去掉上清液,血球泥用生理盐水配成2.50%液应用。
2.溶血素效价测定  溶血素是用绵羊红细胞,经多次免疫家兔,抽取家兔血清,加入甘油而成。在冰箱中可保存二年以上。每隔两、三个月测定效价一次。溶血素可从生物制品厂购买。
溶血素效价测定的方法:先将溶血素稀释成100倍,即0.20ml的溶血素(溶血素实量含0.10ml)加入9.80ml生理盐水混合即可。然后按表6—1配成稀释液:
表6-1溶血素稀释表

另取小反应管一列,按次序从每一稀释液取0.50ml分别加入各管中,添加时应由稀释度大的稀释液加起,这样可不必更换吸管。然后再加入生理盐水1.00ml,1︰20补体和2.50%红细胞悬液各0.50ml。在37℃水浴槽中放20min后判定结果。

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