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| [ 文章来源： | 文章作者：
| 发布时间：2008-03-04|
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（一）材料与试剂
1．副结核分枝杆菌亲和层析抗原
2．草分枝杆菌吸收抗原
3．兔抗牛IgG酶标抗体
4．牛副结核病参考阳性血清
5．牛副结核病参考阴性血清
1～5项均由指定单位供应。
6．器材 ELISA板, 酶联免疫吸附检测仪、加样器、洗瓶、恒温箱等。
7．试剂及溶液配制同第五节猪瘟ELISA。
（二）操作方法
1．抗原包被 以抗原稀释液将副结核亲和层析抗原稀释至50µg/ml,每孔包被0.1ml。部分对照孔以牛血清白蛋白(50µg/ml)包被。
2．血清处理 取待检血清、参考阳性血清、参考阴性血清各0.10ml，加生理盐水0.80ml，加草分枝杆菌吸收抗原0.10ml，混匀，37℃感作1h。取0.10ml，加血清稀释液0.90ml(注意血清稀释液中加牛血清白蛋白，不加犊牛血清)。混匀即可
3．正式试验 按表12－4进行。每个样品加2孔，以求OD平均值。
表12－4 ELISA试验程序表(单位ml)
（三）结果判定
在对照组成立的前提下, 即参考阳性血清呈棕黄色,参考阴性血清及其它对照孔呈无色或浅黄色, 判定待测结果。
1．目测判定 与参考阳性血清孔颜色相当，即呈棕黄色，判为ELISA阳性(＋)。
2．酶标仪判定(490nm) 以底物溶液对照孔调零，校正参考阳性血清OD值为1.0(或相应规定值)，测定待检孔。当OD≥0.50，判ELISA阳性(＋)；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝(±)；OD<0.40，判ELISA阴性(－)。
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