胶体金标记技术路线的选择

1．包埋剂

根据抗原或标记底物性质决定包埋剂种类。

蛋白类，推荐使用K4M；包埋后立即切片标记。

外泌蛋白可选择spurr。可长期保存使用。

细胞结构组分，如纤维素、b-1,3-葡聚糖、几丁质、多酚化合物等，可选择spurr。

2．胶体金体积

精细定位如病毒、细胞器定位等选用5 nm胶体金。细胞壁组分采用15-20 nm胶体金。多标记时，胶体金直径推荐选用6 nm、10 nm、15 nm；稳定抗原采用较大颗粒胶体金。一般蛋白标记采用10 nm。

3．通用探针选择

IgG-gold：-20°C可保存1年；但定位时胶体金距离标记位点较远，不适于精细定位。

Protein A/G：-20°C可保存3个月；但定位时胶体金距离标记位点较近，适于精细定位和多标记。

抗体来源	IgG类型	与Protein A的亲和性	与Protein G的亲和性
人	IgG(正常)	++++	++++
	IgG1	++++	++++
	IgG2	++++	++++
	IgG3	－	++++
	IgG4	++++	++++
小鼠(mouse)	IgG1	+	++++
	IgG2a	++++	++++
	IgG2b	+++	+++
	IgG3	++	+++
大鼠(rat)	IgG1	－	+
	IgG2a	－	++++
	IgG2b	－	++++
	IgG2c	+	++
山羊(goat)	IgG	－	++
绵羊(sheep)	IgG	－／+	++