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质谱样本制备技术资料
试剂耗材：
Milli-Q water、Non-powder gloves、Face mask、Hat、10µl and 200µl tips（eppendorf）、Menthol(Fisher M/4056/17)、Acetonitrile(Fisher A/0626/17)、Trypsin (Promega V528)、Trypsin resolve solution(Promega V530)、Ammonium bicarbonate（Sigma A6141）、ZipTip µC-18（Millipore ZTC18M096）、TFA(GE HealthCare)、0.2ml and 0.5ml EP tube(eppendorf)、50ml EP 0.5ml EP（Corning）
用具仪器：
真空干燥仪、水浴锅、10µ和200µ移液器、废液缸、制冰和装冰设备、200µ管架、剪刀、能装放置了200µ管管架的塑料盒、200µ管离心机。
准备：
1. 0.2ml EP管三套，MilliQ水和甲醇各涮一遍，真空干燥。
2. 50ml EP管六支，MilliQ水和甲醇各涮一遍，真空干燥。
3. 胰酶储液制备：使胰酶粉末沉落瓶底，用100µ胰酶重旋液溶解，用0.5ml EP分装成5µl。
4. 50ml 100 mM NH4HCO3。
脱色酶切：
1. 切点将200µl tip头剪成吸口1.5mm左右的直径，MilliQ水涮洗一遍，吸100µl水后戳取斑点，将胶粒打入0.2ml EP管中，吸干水后再用MilliQ水洗涤两遍，吸干。
2. 脱色 180µl 50%MeOH/50mM NH4HCO3脱色两次以上，每次半小时；180µl MilliQ水洗涤5分钟，180µ 50% ACN洗涤5分钟，180µl 100%ACN洗涤5分钟；真空干燥半小时。
3. 酶切
A：25 mM NH4HCO3稀释胰酶至12.5µg/µl；每管胶粒加入胰酶3µl，冰浴15分钟后洗掉多余的胰酶；再加入3µl左右25 mM NH4HCO3至覆盖胶粒。
B：小心将EP管倒转，将整个EP管架放入塑料盒中后放入37度水浴锅酶切16小时。
C：将塑料盒从37度水中捞出，注意不要倒掉水，冷却至室温。
D：加入10µl 25 mM NH4HCO3，震荡15分钟，离心后收集至新管；
加入10µl 2.5%TFA，震荡5分钟，收集至上管；
加入10µl 2.5%TFA-50% ACN，震荡5分钟，收集至上管；
加入10µl 100% ACN，震荡5分钟，收集至上管。
E：将此收集液真空浓缩至5-10µl后，加入20µl 0.5%TFA；继续浓缩至10-20µl。
肽段浓缩除盐：
A：吸10µl 100% ACN，弃之，重复两次；
B：吸10µl 0.1% TFA，弃之，重复两次；
C：吹吸样本15次；
D：吸10µl 0.1% TFA，弃之，重复两次；
E：吸3µl 0.1% TFA-50% ACN，将此洗脱液转入新EP管。
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SANDWICH ELISA 