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MTT有下面一些优点:
1、有灵敏度高,重复性好,
2、操作简便、经济、快速、易自动化的优点,
3、而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染,
4、还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素
所以可以选择这种实验方法
丁香园网友jiangql的观点为:
MTT 理论可以参见司徒镇强,吴军正主编. 细胞培养. 西安:世界图书出版社. 1996.
MTT,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, 四唑盐. 实验结束前,如杀伤实验或生存曲线培养48h后,加入5mg/mL的MTT 10μL,继续培养4h后离心弃上清,加入DMSO150μL溶解MTT,选择490nm或550nm波长,在酶联免疫检测仪上测定OD值。
有三点体会:
1、MTT的量各家报道不同,一般是过量的,所以10ul即够了。
2、贴壁细胞效果好,悬浮细胞要离心2500rpm×10min,室温, 再吸去培养液,加入DMSO。
3、如果实验孔不多,DMSO加入后可以用枪头吹打混匀,比振荡溶解效果好。
丁香园网友Seattle78的观点为:
MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法,所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT,原理是,活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan,后者的产量与活细胞数成正相关。formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解,在酶标仪上以波长560nm进行比色。所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
优点:灵敏度高,操作简便,自动化。
缺点:影响因素多,重复性较差。
注意:MTT有毒性致突变性,操作时应注意防护。
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