掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理 及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状 结构。

植物细胞用适当浓度的TritonX—100处理 后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋 白质却保护完好。考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)是一种蛋白质染料，处理后 的材料用考马斯亮蓝R250(考马斯亮蓝R250) 染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状 结构，即是细胞骨架结构。

***材料：洋葱鳞叶

洋葱

***试剂：

(1)2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马 斯亮蓝R2501g，溶于250ml无水乙醇中，加 冰醋酸35ml.再加蒸馏至500ml.

(2)磷酸缓冲液(pH 6．8)：6．0mmol／L 磷酸缓冲液，调至pH6.8

(3)M缓冲液(pH 7．2)50mmol／L咪唑， 50mmol/L)氯化钾、0．5mmol／L氯化镁、　1mmol/L 乙二醇(a-氨基乙基)醚四乙酸、0.1mmol/L乙二胺四乙酸； 1mmol／L巯基乙醇，调至pH 7．2。

(4)1%Trion X-100：用M缓冲液配制。

(5)3%戊二醛：用磷酸缓冲液配制；

(6)中性树胶。

***仪器：显微镜，烧杯，镊子。玻璃滴管，载玻片

1.用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片 约1cm²大小若干片)，置于50mL烧杯中，加 入pH6.8磷酸缓冲液，使其下沉；

2.吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X—100 处理20min。

3.吸去Triton X—100，用M缓冲液洗3 次,每次5min。

4.用3％戊二醛固定30min。

5.磷酸缓冲液(pH 6．8)洗3次，每次5min。

6.0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。

7.蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上,加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。

8.如果染色效果好，则可依次用50％乙 醇、70%乙醇,95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理 样品,各5min,然后将样品平展于载玻片上，加 一滴中性树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。

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	洋葱鳞叶内表皮细胞骨架

描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。

如何分析细胞骨架的成分?