梭华-SofastTM 基因转染试剂
梭华-Sofast
TM 是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，梭华-Sofast
TM 具有高效率转染所必备特征，如浓缩
DNA，将
DNA运送到
细胞内，并使其在
细胞核内释放等；梭华-Sofast
TM 的
细胞毒性很低，这是它的另一个重要特点；而且与其它转染试剂相比，梭华-Sofast
TM 很稳定，不被血清清除。以上优点使得基因转染的操作简便易行，重复性好。梭华-Sofast
TM 已被成功应用于很多原代培养
细胞和转化
细胞株的基因转染。
一. 特点
★ 转染效率高且稳定，比目前常用产品高10%。
★
细胞培养基中的血清存在与否，均能获得高效率转染。
★ 转染程序简单，转染前后无需更换培养基转染实验可以在半小时内完成。
★ 价格比进口产品便宜60%。
★ 完善的技术支持，保证质量，无效退货。
二. 效果比较
将梭华转染试剂与其它公司的聚阳离子转染试剂和常用的脂质体转染试剂分别在常用
的报告基因如GFP、荧光素酶基因和LacZ基因的转染效率方面作了对比。
实验表明:
1. 梭华-Sofast
TM 具有很高和稳定的转染率，是一种很好的基因转染试剂。对某些常用的
细胞株梭华-Sofast
TM 转染率高于某常用阳离子脂质体，对其他多数
细胞株的转染效率相近。
2. 需特别指出梭华-Sofast
TM 在原代培养
细胞HUV-EC中有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此
细胞的转染效率很低。
3. 通过检测转染
细胞荧光素酶基因的活性，测定其转染效率。实验表明梭华转染试剂具有最高的转
染率。
4. 通过检测转染GFP基因的
细胞所发出的荧光强度来测试转染效率，实验发现梭华转染试
剂的转染率比常用的脂质体转染试剂转染率高达5-10%。
三. 适用范围 ☉ 适应于众多原代培养
细胞和转化
细胞株的基因转染。
☉ 适用于瞬时转染和稳定转染。
☉ 适应于贴壁
细胞和悬浮
细胞转染。
四. 各种转染方法的比较（在目前使用的方法中, 阳离子聚合物转染法是最好的转染试剂。）
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转染方法 |
原理 |
主要应用 |
特点 |
主要的厂家
及产品 |
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DEAE－葡聚糖法 |
正电DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的
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瞬时转染 |
相对简便,但对 细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系。 |
Sigma |
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磷酸钙法 |
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稳定转染
染瞬转染 |
不适用于原代 细胞（所需的 DNA浓度较高）,操作简便但重复性差,有些 细胞不适用。 细胞建议用CSCL梯度离心。 |
GIBCO BRL Promega |
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阳离子
脂质体法 |
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物,然后脂质体上剩余的电核与 细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合;另一种解释是通过 细胞是内吞作用而被进入 细胞。(若 DNA浓度过高,中和脂质体表面电核,而降低了与 细胞的结合能力) |
稳定转染
瞬时转染
|
使用方法简单,可携带大片段 DNA,通用于各种类型的裸露 DNA或RNA,能转染各种类型的 细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了其应用。 |
Lipofectamine
2000Cellfectin
Roche
（Dosper
FuGENE 6）
Promeg（Transfast
Transfectam） |
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阳离子
聚合物法 |
带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与 细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用 |
稳定转染
瞬时转染
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除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高, 细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。 |
梭华－Sofast
Qbiogene
Qiagen(Super
Fect Polyfect) |
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病毒介导法 |
通过病毒中膜糖蛋白和宿主 细胞表面的受体相互作用而进入宿主 细胞,之后反转入酶启动合成 DNA并随机整合到宿主基因 组中。 |
稳定转染
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可用于难转染的 细胞、原代 细胞,体内 细胞等,但携带基因不能太大（<8kb）, 细胞需处分裂期,需考虑安全因素。 |
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Biolistic
颗粒传法
（基因枪粒子轰击法） |
将 DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入 细胞, DNA在胞内逐 步释放,表达 。 |
瞬时转染
稳定转染 |
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显微注射法 |
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稳定转染
瞬时转染 |
转染 细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎 细胞。 |
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电穿孔法 |
高脉冲电压破坏 细胞膜电位, DNA通过膜上形成的小孔导入 。 |
稳定转染
瞬时转染
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适用性广,除了质粒外,还可转染大的基因组（>65kb）但 细胞致死率高, DNA和 细胞用量大,需根据不同 细胞类型优化电穿孔实验条件,拷贝数较少1-20。 |
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五. 成功的案例
已使用本产品的部分参考文献：
1． 杨天赐，陈明桥，黄革玲。 新一代阳离子聚合物转染试剂（梭华－Sofast）转染效果研究。 厦门大学学报（自然科学版）2004，43(4)： 572-577。
2． 赫 兢, 辛绍杰, 毛远丽, 貌盼勇, 沈宏辉, 杨健洋, 徐军, 孔维。前S2抗原基因对乙型肝炎DNA疫苗免疫应答的影响。世界华人消化杂志
， 2004，12
(9)：2196-2198。
3． 李忠玉, 吴移谋, 陈超群, 尹卫国 。沙眼衣原体ompA 基因真核表达载体的构建
及在HeLa 细胞中的表达。
实用预防医学，2004，11(2)：212-214。
4． 赵伟光，张建林，吴建国,朱应，李雁，朱忠超，刘志苏。 HBx蛋白与Hepsin共表达可促进HBV复制，中国病毒学，2004，19(4):345-348。
5． 张建林，邬开朗，张雪，朱应，李雁，赵伟光，吴建国。 siRNA表达载体的构建及其鉴定中国病毒学，2004，19(5): 515-518。
6． 王勤，龚跃法，杨祥良。基因载体阳离子聚合物的研究进展。广东药学院学报， 2004,20(1)：62-64。
7． 陈海靓,梁文权。阳离子聚合物在基因给药中的应用。中国药学杂志，2004，39(1)：11-13。
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来源 |
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HEK 293 |
Human |
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HeLa |
Human |
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NIH 3T3 |
Mouse |
胚胎纤维原 细胞（Embryo fibroblast） |
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BNL CL2 |
Mouse |
胚胎肾 细胞（Embryonic kidney cells） |
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HepG2 |
Human |
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COS7 |
Monkey |
SV40转化肾 细胞（SV40 liver transformed） |
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CHO |
Chinese hamste |
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5HSY-5Y |
Human |
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IMR 32 |
Human |
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MRC5 |
Human |
胎儿肺上皮 细胞（Fetal lung epithelium） |
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MCF7 |
Human |
乳腺癌 细胞（Breast adenocarcinoma） |
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K562 |
Human |
慢性白血病 细胞（Chronic leukemia） |
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SKOV-3 |
Human |
卵巢腺癌 细胞（Ovarian adenocarcinoma） |
|
IGROV-1 |
Human |
卵巢腺癌 细胞（Ovarian adenocarcinoma） |
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HUV-EC(primary cell) |
Human |
脐带静脉内皮状 细胞（Umbilical vein endothelial cell） |
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C6 |
Rat |
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六. 订购信息
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货号 |
品名 |
规格 |
转染次数 |
价格 |
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11103 |
Sofast转染试剂 |
0.3 ml |
50-100次 |
￥435 |
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11105 |
Sofast转染试剂 |
0.5 ml |
80-165次 |
￥720 |
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11110 |
Sofast转染试剂 |
1.0 ml |
165-330次 |
￥1,365 |
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11120 |
Sofast转染试剂 |
2×1.0 ml |
330-660次 |
￥2,350 |
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11140 |
Sofast转染试剂 |
4×1.0 ml |
660-1320次 |
￥4,100 |
七. 常见问题与解决方法
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问 题 |
评论与建议 |
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转染效率低 |
1. 质粒浓度太低-建议使用最适宜的质粒数量。 2. 质粒纯度太低-建议使用高质量的质粒(OD260/280>1.8)。 3. 细胞生长状态欠佳-建议保证 细胞密度和形态是最佳的。 4. 梭华-Sofast TM/ DNA比率未优化----优化梭华-Sofast TM/ DNA比率(重量比从16:1到4:1)。 5. 设立阳性对照，例如GFP Gene和luciferase Gene-以便检查转染结果。 |
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1. 接种前， 细胞的健康状况直接影响 细胞毒性。 2. 基因转染时 细胞密度不合适会引起 细胞毒性。 3. 保持梭华-Sofast TM/ DNA比率的同时减少质粒的数量。 4. 对某些敏感的 细胞株减少梭华-Sofast TM/ DNA复合物的培养时间。 5. 确定基因产物是否有毒性。 6. 确认质粒没有内毒素。 |
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