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基础生化实验--温度、PH对淀粉活性影响
一、 教学目的和要求：
加深对酶性质的认识；了解酶的最适温度和最适PH值。
二、 教学实验原理：酶的催化活性受到温度的影响，在一定温度范围内，酶才有活性，且在最适温度下，酶反应速度最大。大多数动物酶的最适温度为37℃-40℃，植物酶的最适温度为50℃-60℃。对温度的稳定性与其存在形式有关，有些的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显变，但在100℃的溶液中很快地完成失去活性。低温能降低或抑制的活性，但不能使失活。
酶的活性受环境受PH的影响极为显著。通常各种只在一定的PH范围内才能表现它的活性。一种酶表现其活性最高时的PH值。称为该酶的最适PH。低于或高于最适PH值，酶的活性逐渐降低，不同酶的最适PH不同。酶的最适PH值，受到底物性质和缓冲液性质的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适PH值为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则5.6。
三、教学主要内容：温度对酶的影响：取3支试管，按下列表格操作
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管号 |
1 |
2 |
3 |
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0.2%淀粉—NaCl液（ml ） |
1.5 |
1.5 |
1.5 |
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稀淀粉酶 |
1.0 |
1.0 |
/ |
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煮沸淀粉酶 |
/ |
/ |
1.0 |
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温度处理（10分钟） |
37℃ |
冰浴 |
37℃ |
|
温度处理（10分钟） |
/ |
/ |
/ |
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加KI—I2 |
2—3d |
2—3d |
2—3d |
注：*2号管冰浴10分钟后分成二半、一半加碘试剂一半37℃保温10min后加碘试剂。
PH对酶活性的影响：取7支试管，按下表加各种试剂。
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管号 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
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缓冲液PH值 |
5.8 |
5.8 |
6.2 |
6.6 |
6.8 |
7.2 |
8.0 |
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缓冲液用量（ml） |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
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0.5%淀粉—0.5%NaCl液(ml) |
2.5 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
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淀粉酶液（ml） |
0 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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37℃保温 |
5min |
5min |
5min |
5min |
5min |
5min |
5min |
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2MNaOH(ml) |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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DNS试剂（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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沸水浴（分钟） |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
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冷却 |
l 自水冷却到室温 |
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OD54Onm |
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四、实验注意事项：
1、 反应结果如不明显调节保温时间和酶液浓度。
2、 温度结果要先准备好煮沸的酶液和冰浴再加入试剂。冰浴处理10分钟后的那支试管内的溶液要取约一半放在室温继续反应。
3、 PH实验时各管中所加缓冲溶液的量虽然相同但PH不同，要注意。另处N aOH 要在保温后才能加入。加入酶液和加NaOH时要严格控制时间，尽量保证各管反应一致。
五、思考题：
1．为什么温度会影响酶的活性？
2． PH值对酶的活性如何影响？什么是最适PH？与那些因素有关？
3．为什么温度对酶的活性具有双重影响？
4． 什么是酶的最适温度？它是表征常数吗？与那些因素有关？有何实践意义？
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基础生化实验--温度、PH对