用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的折叠特性研究
白泉, 孔宇, 耿信笃, 高等学校化学学报, 2002, 23 (8) : 1483-1488
用疏水相互色谱(HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究。结果表明，采用普通流动相时,对还原胍变胰岛素的复性效果较差，而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到66%，并用反相色谱(RPLC)、紫外吸收光谱、荧光光谱及MALDI-TOF对其复性效果进行了验证。同时与体积排阻色谱(SEC)和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较。结果表明，SEC根本无法使还原胍变胰岛素复性，而稀释法的复性效率仅有2%。这进一步表明HPHIC是变性蛋白复性的有效工具，变性蛋白在疏水界面折叠过程中，蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用，是蛋白折叠的主要驱动力。
中国科学, 2002, 32 (5) : 460-471
用疏水色谱复性并同时纯化蛋白质的机理及其应用
耿信笃, 白泉
变性蛋白表面的疏水氨基酸残基有与疏水色谱固定相（STHIC）颗粒相互作用的倾向，两者之间的疏水相互作用能够抑制变性蛋白分子之间的相互聚集，同时疏水色谱固定相还能在分子水平上给变性蛋白分子提供足够高的能量，使其瞬时脱水并折叠成其天然构象或不同的折叠中间体。变性蛋白在疏水界面上的折叠不仅取决于其氨基酸之间的特异性相互作用及疏水色谱固定相的结构，而且还取决于固定相和流动相之间的协同作用。同时，还提出了高效疏水相互作用色谱（HPHIC）进行蛋白折叠的机理及其进行蛋白折叠时就能实现质量控制的原理。在适当的色谱条件下，HPHIC可使几种变性蛋白一步实现复性及同时纯化。此外，还设计制造出了直径比柱长大得多的实验室型和制备型“变性蛋白复性及同时纯化装置，USRPP”，该“装置”具有完全除去变性剂、使蛋白质复性、与杂蛋白分离及易于回收变性剂的“一石四鸟”功能。该“装置”对变性蛋白的复性和纯化效率与通常使用的长柱相当。在制备规模情况下，该“装置”可以在低压梯度条件下简便、快速、而经济地应用于重组蛋白药物的制备。文中以重组人干扰素-g为例，说明了制备型“装置”在其复性及同时纯化生产工艺中的应用。
高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究
王彦, 耿信笃, 色谱, 2003, 21 (3) : 218-221
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察，发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM-GM1型色谱柱上的复性效率最高，当Lys质量浓度为2 0 g/L时，其复性效率可达到94.6%。
Studies on renaturation with simultaneous purification of recombinant human proinsulin from E. coli with high performance hydrophobic interaction chromatography
Quan Bai, Yu, Kong, Xindu Geng, Journal of liquid chromatography & related technologies, 26 (2003) 683-695
The renaturation with simultaneous purification of recombinant human proinsulin (rh-proinsulin) expressed in E. coli by high performance hydrophobic interaction chromatography (HPHIC) was investigated. The result indicates that the reduced/denatured rh-proinsulin, extracted with 8.0 mol/L urea solution in the presence of b-mercaptolethanol can be renatured and purified, simultaneously, in 45 min with HPHIC, resulting in the purity and mass recovery being more than 90% and 94%, respectively. The disulfide bonds of rh-proinsulin can correctly form on the HPHIC column without the presence of reduced and oxidized glutathione (GSH, GSSG). The renaturation efficiency of rh-proinsulin with HPHIC was tested by enzyme cleavage in order to obtain insulin. The result was also confirmed with RPLC, SDS-PAGE, and MALDI-TOF, respectively. The renatured and purified rh-proinsulin can directly be enzyme-cleaved in the collected fraction containing the rh-proinsulin. Thus, the technology for the renatured and purified rh-proinsulin is very simple and fast