JEOL　GSX－270MH_Z型核磁共振仪，室温，CDCL₃溶剂，TMS内标；（S）－TBMB甲酸、（R，S）－TBMB甲酸、3－氨基－3－脱氧－D－葡萄糖、4－氨基－4－脱氧－D－甲基葡萄糖苷、6－氨基－6－脱氧－D－葡萄糖按文献方法制备，2－氨基－2脱氧－D－葡萄糖盐酸盐、2－氨基－2－脱氧－D－甘露糖、2－氨基－2－脱氧－D－半乳糖、N，N－二甲基甲酰胺、异丙醇、乙腈(HPLC用）、三乙基胺购于Sigma，其他试剂均为国产分析纯试剂。

　　在10ml体积的锥型试管中加入3ml氨基糖或其盐酸盐及500μl甲醇，搅拌，待氨基糖完全溶解后加入20μl三乙基胺，搅拌３min后，加入500μl（Ｓ）－ＴＢＭＢ酰氯的二氯甲烷溶液［含３５mg（Ｓ）－ＴＢＭＢ酰氯］，搅拌10 min后，将反应液真空浓缩。浓缩物中加入500μl吡啶，100μl醋酸酐，.45摄氏度反应30 min。反应结束后加入500μl乙醇，500μl甲苯搅拌5 min，减压浓缩，浓缩物经薄层层析（甲苯：乙酸乙酯＝2：1）纯化后得到完全乙酰基化氨基糖羧酸衍生物，用于HNMR测定。

1.2.2　HPLC分离分析氨基糖D、L异构体氨基糖的D、L－异构体分析在CCPM型HPLC装置，FS－8010型荧光检测仪（Tosoh，Japan）上进行。层析柱为反相ODS柱（4.5mmX150mm，Shisedo，Japan）。移动相溶液乙腈：水：异丙醇＝4：4：1或乙腈：水：异丙醇＝3：7：2（W：W：W），荧光检测波长Em：310nm，Ex：370nm。

　　糖的衍生化反应包括（S）－TBMB羧酸荧光标识反应及常规的完全乙酰基化反应两个部分。荧光标识反应中，（S）－TBMB甲酸被转化为其对应的酰氯（溶于二氯甲烷，保存在－20摄氏度，3天内使用，不影响反应得率）在甲醇与三乙基胺的混合溶液中与氨基糖反应。这一反应中存在（S）－TBMB酰氯的加水分解副反应。反应液pH值或溶液的含水量过高均会促进这一副反应的进行。因此，选用微量的三乙基胺为碱基催化剂，反应试剂均经分子筛（0.4nm）干燥，并保存在真空干燥箱中。荧光标识反应结束后，反应液的浓缩物被直接用于第二步的完全乙酰基化反应。本研究中使用过量的)TBMB *荧光标识试剂，氨基糖的衍生化反应经薄层层析检测未见有其他副反应生成物。由于4－氨基吡喃糖极易发生分子内脱水反应，在中性乃至弱酸性条件下，生成1,4二脱氧－1,4－亚氨基糖醇，其合成及与（S）－TBMB酰氯的衍生化反应均十分困难。而结合于C4位的TBMB试剂与C1位距离较远，C1位基团对4－氨基糖D、L体分离影响较小。因此本研究选择了稳定的4－氨基－4－脱氧－D－甲基葡萄糖苷为.4－氨基糖的分析模型分子。