由图3可见，缓冲溶液pH在2.7、3.0和3.5时分离较好，R在1.7以上。pH大于3.5时，分离度下降较大。其原因可能是提高缓冲溶液酸性使洛索洛芬钠离子化程度降低，更容易与OJ-RH手性固定相发生相互作用，有利于手性分离。但使用不加三乙胺的pH 2.7的醋酸溶液时，分离重现性不好，峰对称性较差，故实验选择pH 3.0。
3.3  缓冲溶液浓度对分离的影响
    选择甲醇:醋酸-三乙胺（pH 3.0）=80:20，考察缓冲溶液浓度对分离的影响，结果见图4。表示洛索洛芬钠的第一个与第二个异构体峰的分离度，k'表示洛索洛芬钠第一个峰的保留因子。可见，浓度在0.20 mol/L时保留因子最大，但分离度反而下降；此时紫外本底吸收也较大，0.10 mol/L时保留因子最小，分离度较好，所以实验选用此浓度。
3.4  有机改性剂的比例对分离的影响
    用甲醇与0.1 mol/L醋酸-三乙胺（pH 3.0）不同配比混合作流动相，随着甲醇比例从80%每减小5%，洛索洛芬钠的保留因子增大接近1倍，但分离度R增加较少，而且峰变宽。根据此柱使用的要求，实验中使用D>P甲醇，没有使用更大比例。
3.5  不同缓冲溶液种类对分离的影响
    使用0.1 mol/L醋酸-三乙胺缓冲溶液，0.5 mol/L HCLO4-NaCIO4缓冲溶液，0.2 mol/L磷酸-磷酸二氢钠作缓冲溶液，甲醇作有机改性剂。在相同的pH和相同甲醇比例条件下，使用醋酸-三乙胺缓冲溶液和缓冲溶液对洛索洛芬钠4个异构体的相邻峰均具有≥1.7的分离度，保留因子也很接近，磷酸-磷酸二氢钠作缓冲溶液对洛索洛芬钠的保留因子明显增大，但第一个峰与第二个峰的分离度却明显降低（小于1.0）。另外，用0.5 mol/L HCLO4-NaCIO4  作缓冲溶液，pH2.0时分离度比pH为3.0时差。
3.6  不同有机改性剂对分离的影响
　　用0.5 mol/L HCLO4-NaCIO4作缓冲溶液，比较甲醇：缓冲溶液=80：20和乙睛：缓冲溶液= 30：70这两种流动相，乙睛体系对洛索洛芬钠的保留时间较长，但分离度却下降。表明在分离洛索洛芬钠时，甲醇是优良的有机改性剂。流动相中有机改性剂对Chiralcel OJ-R柱手性分离能力有很大影响，可能是有机改性剂会和溶质竞争手性和非手性位点，各改性剂的占位效应不同，有机改性剂的结构不同，可能会影响纤维素手性固定相螺旋沟槽的性质，从而影响它的嵌合作用。