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本实验使用高效液相色谱法,在三(对甲苯甲酸)纤维素酯手性固定相(Chiralcel OJ-R)柱上用极性流动相直接拆分洛索洛芬钠,得到完全分离的3个异构体的色谱峰,确认了各峰的结构归属,并详细考察了不同流动相条件对分离结果的影响。Kanazawa等使用非极性流动相在不同的Chiralcel OJ-R手性柱上拆分洛索洛芬钠的4个对映体,但是分离时间是本方法的2倍,分离度也不如本方法。 2 实验部分 2.1 仪器、试剂与样品 Waters液相色谱仪(包括510泵、481紫外检测器和U6K进样阀);色谱工作站( 上海军锐);pHs3c型精密45计(上海雷磁仪器厂);J-820型园二色谱仪(日本JASCO公司)。 甲醇(色谱纯,上海化学试剂研究所);乙腈(色谱纯,Merck公司);三氟醋酸为国产化学纯,其它均为国产分析纯。纯蒸馏水(上海斯柏克林公司)。 洛索洛芬钠外消旋体样品自行合成,其结构式见图1;两个手性中心分别位于丙酸的a位(1'位),环戊酮的a位(2位)。样品溶解在甲醇中配制,浓度约为0.3g/L,进样量10μL。 2.2 色谱条件 手性色谱柱Chiralcel OJ-R(15cmX4.6mm i.d.)系日本Daicel公司产品。检测波长222nm;流速均为0.5mL/min。所有的色谱分离均在室温(约20摄氏度)下进行。 3 结果与讨论 3.1手性分离结果 在所用仪器条件下,使用Chiralcel OJ-R手性柱,在甲醇:0.1 mol/L醋酸-三乙胺(ph 3.0)= 80:20的流动相条件下,拆分洛索洛芬钠的4个异构体的典型分离谱图见图2。 3.2 流动相中缓冲溶液%& 对分离的影响 使用0.1moL/L醋酸溶液(ph为2.7),并以三乙胺调缓冲溶液的pH分别为3.0、3.5、4.0和5.0的缓冲溶液,用甲醇:0.1 mol/L醋酸-三乙胺=80:20作为流动相,考察了在不同pH条件下对洛索洛芬钠分离度的影响。结果表明:洛索洛芬钠后3个峰之间均能得到很好地分离。最难分离的是第一个峰和第二个峰,所以用洛索洛芬钠消旋体的第一个峰与第二个峰的分离度R,作为考察指标,其与缓冲溶液pH的关系见图3。
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