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固定化细胞法是利用惰性基质作为固定化载体将生物细胞包埋或吸附在其表面,然后用于催化有机化合物的生物转化,生成所需产物的方法。固定化微生物细胞生物转化法将微生物的生长与它的生物催化过程相分离。该法的优点是固定化细胞可以长时期保持其稳定,并可反复使用。缺点是固定化细胞的生物转化活性一般比游离细胞的生物催化活性低,这主要是由于固定化载体对反应物的扩散增加了额外屏障所致。固定化细菌类细胞则相对比固定化真菌类细胞容易。为了解决真菌类菌丝体的复杂性和多样性,可固定化真菌孢孔固定化孢子与生长细胞和静息细胞(又称休止细胞)生物转化的产物相同。真菌在有利于孢子生长的特定条件下生长时,可大量产生孢子,在无菌条件与与菌丝体分离后,可长时间低温保藏。孢子可悬浮于含底物的溶液中直接生物转化,也可固定化后再用于生物转化。 固定化细胞常采用凝胶类载体,如聚丙烯酰胺凝胶、海藻酸钙和卡拉胶凝胶以及其他 的多孔性聚合物,也可采用纤维素类聚合物将细胞吸附在固体表面。固定化细胞可用于摇瓶 中催化反应,更为经济的方法是用柱式反应器进行固定化细胞生物转化。固定化细胞也可悬 浮于培养基中发酵生长同时进行生物转化,以保证辅酶的再生以及新活性细胞的生长,维持 催化反应的最高活性水平。 大肠杆菌(Escherichia coli) ASl.881含有高含量的天冬氨酸酶,它能将延胡索酸1转化为L—天冬氨酸2。细胞经培养后,离心收集菌体,采用卡拉胶固定化细胞。将含天冬氨酸酶的固定化E.coli装填制成柱式生物反应器。将保温至37℃的延胡索酸铵(含1mmol/L MgCl2,pH 28.5底物溶液按一定空间速度(Sv)连续流过生物反应柱,收集转化液。转化液经过滤澄清尽搅拌下用HCI调至pH2.8,5℃结晶过夜后处理,得L-Asp粗品。
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