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| [ 文章来源： | 文章作者：
| 发布时间：2007-03-28|
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如果是高压二元梯度泵，用超声脱气就行了。把溶剂瓶放到59kz的超声清洗机超至没有白白的气泡上来就行了。四元的是混合后脱气，比较重要，一般都会配脱气机，我也没用过，不说了。如果是要求检测限很小的分析，有几点建议，首先，如果是等度洗脱，一定要改成单元等度，即流动相混合到一个瓶子里；第二，尽量用乙腈/水系统洗脱，乙腈紫外吸收小，相同条件下，噪音小很多；在前两样都解决不了，那只好通氦脱气了。梯度洗脱，如果像人参皂苷之类的，尽量用乙腈/水系统洗脱，不行就通氦啰。
做了那么久液相，堵塞流路的事情碰过几回，都是无机盐配的缓冲液惹祸，都不关过滤的事。缓冲液换有机相冲柱时，有人一不注意没冲干净无机盐就冲甲醇，结果就塞了。千万要用90%左右的水先冲干净盐。不锈钢管路堵了好办，烘箱烘之，再冲开。柱子堵了，我还没试过。
其实，做HPLC通常担心的是做不出理想的结果和坏柱子。
理想的结果，主要的就靠流速精确的和检测限。流速精确才能保证保留时间精确，这与机器性能有关，不谈了。检测限越低就等于色谱峰可以的误差可以越小。根据我的经验，二元等度会使噪音峰高大大增加，所以做等度不要用二元，除非，你的样品峰高远远高于噪音（20倍以上吧）。可以的话，使用乙腈自然比甲醇好。空气的存在也会影响噪音，甚至是出鬼峰，还是那句，不行就通氦啰。additives（添加剂）也要注意，看看添加的三乙胺、乙酸之类的截止波长是多少，低于她的截止波长就是不透过，会极大的增大噪音。
噪音是怎样造成的呢，就是往复泵的脉冲和流动相的基础吸收，用单元泵是为了降低脉冲；用乙腈就是降低基础吸收。物质的紫外吸收系数一般是固定的，降低噪音提高检测限的出发点就是以上两方面了。但是物质在不同的溶剂里，紫外吸收系数是不一样的，有时候添加剂也会影响，特别是酸，乙酸、磷酸、盐酸有时候值得选择一下。
保护柱子，就是不要堵了，不要污染。我一般不用保护柱，得不偿失，国内的不能用，国外得太贵。我就两招：用3%乙酸溶液和甲醇二元梯度100%甲醇到10%甲醇，一小时做个来回，柱子耐不了pH10的就用1%乙酸，这东西，降柱压有奇效，目前为止我是百试百灵；另一招就是挖柱填柱了。
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凝胶色谱法简介