2.2 试液和标准贮备液的配制 配制(R/S)- PPF溶液(10ng/m l甲醇)；(S)- PPF溶液(5ng/m l甲醇)；(R)- PPF溶液(5ng/m l甲醇)；内标Li-1115溶液(20ng/m l甲醇)；Tris缓冲液(0.1M取三羟甲基氨基甲烷12.1g溶于1000ml水中，用NaOH液(4g→10ml)调节pH12)；GITC试液(1mg/ml乙腈)；人体、空白血浆；在武汉市血库中心的帮助下，抽取一未服任何药物的健康青年男性全血，离心分离出血浆，置于- 30℃保存。
2.3 血浆中PPF的提取方法 取含药血浆1ml，置10ml离心管中，加入20m l内标Li 1115溶液(20ng/m l甲醇)，500m l Tris缓冲液，再加入5ml二氯甲烷，用快速混匀旋涡器混旋提取1分钟，以3000转/min的速度离心分离10分钟，将有机层转移到另一试管中，氮气流吹干(水浴温度<40℃)，得PPF和内标残留物。
2.4 衍生化反应 在上述残留物中加入40m l GITC试液，加入60m l乙腈，用快速混匀旋涡器混旋1分钟，室温放置40分钟使衍生化反应完全，氮气流吹干(水浴温度<40℃)。再加入40m l流动相，用快速混匀旋涡器混旋1分钟使溶解，取20m l注入色谱系统。
2.5 色谱行为 在本测试条件下，(S)- PPF、(R)- PPF、内标Li-1115均有足够大的峰高，血浆杂质峰无干扰，内标1峰，内标2峰(对映体)、(S)- PPF峰、(R)- PPF峰的保留时间分别为10.3、11.3、13.1、14.2min，各峰之间有较好的分离度(图1)。仪器最小检出值(上柱实测值)为(S)- PPF或(R)- PPF2ng。因内标标准品为一消旋体，经衍生化后也有2个峰并得到好的分离，可任选一峰或两峰加和作内标，本文选内2峰作内标信号。
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HPLC的正确使用和科学保养