首 页网站地图RSS订阅高级搜索保留
生物实验网
设为首页
加入收藏
站长信箱
主页|bio资讯 |DNA实验 |PCR实验 |RNA实验 |蛋白实验 |基本实验技术 |生化与免疫技术 |生物信息学 |细胞生物学 |杂交实验 |学科相关 |交叉领域 |
当前位置: 主页>交叉领域>生物化学> 查看文章详细内容
站内资料搜索
热门关键字: dna  EST  r DNA  pcr  抗体  rt pcr  t dna  tail pcr  PCR sscp  cDNA

相关文章
>高效液相色谱系统中气泡对
>吸附色谱、分配色谱、离子
>高效液相色谱仪的几个使用
>分配色谱的出现
>HPLC培训教程 V.HPLC应
>高效液相色谱(HPLC)问题
>HPLC培训教程 IV.固定相
>色谱常见问题问答
>HPLC培训教程 III.HPLC
>高效液相色谱法测定虎杖中
热点文章
基础生化实验--双缩脲法测
植物生理生化实验教学大纲
基础生化实验--蛋白质性质
基础生化实验--酶的激活和
基础生化实验--温度、PH对
基础生化实验--温度、PH对
化学基因组学-深圳微芯
对映体的测定--用手性位
对映体的测定--用于NMR
对映体组成的测定--比旋
过柱的实验方法和技巧
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2007-03-28|  字体: [ ]  
  常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。
  一:柱子可以分为:加压,常压,减压
  压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。
  减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。
  加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
  二:关于柱子的尺寸
  应该是粗长的最好。柱子长了,相应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保的说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
  现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。

共4页: 上一页 1 [2] [3] [4] 下一页


上一篇:高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法   下一篇:吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱
设为首页 - 加入收藏 - 关于我们 - 版权申明 - 程序支持 - 联系方式 - 留言薄 - 会员中心
Power by DedeCms