• 微生物染色液配制及染色法

2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0.3g95%乙醇 30mL0.01%氢氧化钾溶液 100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。2.1.3 结果菌体呈蓝色。

2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫 1g95%乙醇 20mL1%草酸铵水溶液 80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。2.2.2 革兰氏碘液碘 1g碘化钾 2g蒸馏水 300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。2.2.3 沙黄复染液沙黄 0.25g95%乙醇 10mL蒸馏水 90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红 0.3g95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸 3mL95%乙醇 97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。 2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。

2.4 柯氏染色法2.4.1 染色液2.4.1.1 0.5%沙黄液。2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。2.4.2 染色法2.4.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。2.4.3 结果布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。

2.5 奥尔特氏荚膜染色法2.5.1 染色液沙黄 3g蒸馏水 100mL用乳钵研磨溶解。2.5.2 染色法将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。2.5.3 结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。

2.6 瑞氏染色法2.6.1 染色液瑞氏色素 0.1g甲醇 60mL用乳钵研磨溶解。2.6.2 染色法2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。2.6.2.3 用蒸馏水冲洗，待干，镜检。

2.7 鞭毛染色法2.7.1 染色液的配制2.7.1.1 甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。2.7.1.2 乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。2.7.2 染色法在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。2.8 碱性复红染色法将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别