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Protocol for Reverse Transcription and Amino-allyl Coupling of RNA
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2007-08-28|  字体: [ ]  

Decant flow-through.

Spin at high speed to dry column.

Transfer spin unit to fresh eppendorf tube.

Add 30 mL Buffer EB to center of filter and allow to sit 3 minutes at RT.

Spin at 13K rpm for 1 minute.

Repeat elution step again with another 30 mL of Buffer EB.

Pool eluates.

Add 20 mL (20 mg) Cot DNA (Gibco).

Add 420 TE and apply to fresh Microcon-30 filter.

Spin 12,000g to a volume of 29 mL or less.

For 38 mL array hybridization:

29 mL cDNA probe in TE

1 mL polyA (10 mg; Sigma P9403)

1 mL tRNA (10 mg; Gibco #15401-029)

7 mL 20X SSC

1.2 mL SDS 10%

Heat to 100C for 2 minutes. Let stand 15 minutes RT.

Apply 38 mL to 40K array.

* Slight modifications to original protocol by Mitch Garber and Anatoly Urisman.

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