4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
|
碱基 |
波长（nm） |
消化系数（ε）[L/（mol·cm）] |
|
A |
259 |
1.54×104 |
|
G |
253 |
1.37×104 |
|
C |
271 |
9.10×103 |
|
T |
260 |
7.40×103 |
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
杂交试验中用于降低背景的封闭剂
(六)、常用凝胶的技术参数
1．葡聚糖凝胶的某些技术数据
|
种类
|
干颗粒直径（μ）
|
分子量分级范围
|
床体积毫升/克干分子筛
|
得水值
|
溶胀最少平衡时间（h） |
柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱)
|
|
肽及球形蛋白质 |
葡聚糖（线性分子） |
室温 |
沸水浴 |
|
Sephadex G-10 |
40～ 120 |
～700 |
～700 |
2～ 3 |
1.0±0.1 |
3 |
1 |
|
|
Sephadex G-10 |
40～ 120 |
～1500 |
1500 |
2.5～3.5 |
1.5±3.5 |
3 |
1 |
|
|
Sephadex G-25 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
粗级 |
100～300
(≈5～100目) |
|
|
|
|
|
|
|
|
中级 |
50～150
(≈100～200目) |
1,000～
5,000 |
100～
5,000 |
4～6
|
1.5±0.2
|
6
|
2
|
|
|
细级 |
20～800(≈200～400目) |
|
|
|
|
|
|
|
|
超细 |
10～40 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Sephadex G-50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
粗级 |
100～200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
中级 |
50～150 |
1,500～ |
500～ |
|
|
|
|
|
|
细级 |
20～80 |
30,000 |
10,000 |
9～11 |
5.0±0.3 |
6 |
2 |
|
|
超细 |
10～40 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Sephadex G-75 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40～120 |
3,000～ |
1,000～ |
|
|
|
|
|
|
超细 |
10～40 |
70,000 |
950,000 |
12～15 |
7.5±0.5 |
24 |
3 |
3.92～15.86 |
|
Sephadex G-100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40～120 |
4,000～ |
1,000～ |
|
|
|
|
|
|
超细 |
10～40 |
1,500,000 |
150,000 |
15～20 |
10.0±1.0 |
48 |
5 |
2.35～9.41 |
|
Sephadex G-150 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40～120 |
5,000～ |
1,000～ |
20～30 |
|
|
|
|
|
超细 |
10～40 |
400,000 |
150,000 |
18～22 |
15.0±1.5 |
72 |
5 |
0.88～3.53 |
|
Sephadex G-200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40～120 |
5000～ |
1000～ |
30～40 |
|
|
|
|
|
|
10～40 |
800,000 |
200,000 |
20～25 |
20.0±2.0 |
72 |
5 |
0.39～1.57 |
2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
|
型号 |
排阻的下限
(分子量) |
分级分离范围
(分子量) |
膨胀后的床体积(ml/g干凝胶) |
膨胀所需最少时间(室温,h) |
|
Bio-gel-P-2 |
1,600 |
200～2,000 |
3.8 |
2～4 |
|
Bio-gel-P-4 |
3,600 |
500～4,000 |
5.8 |
2～4 |
|
Bio-gel-P-6 |
4,600 |
1,000～5,000 |
8.8 |
2～4 |
|
Bio-gel-P-10 |
10,000 |
5,000～17,000 |
12.4 |
2～4 |
|
Bio-gel-P-30 |
30,000 |
20,000～50,000 |
14.9 |
10～12 |
|
Bio-gel-P-60 |
60,000 |
30,000～70,000 |
19.0 |
10～12 |
|
Bio-gel-P-100 |
100,000 |
40,000～100,000 |
19.0 |
24 |
|
Bio-gel-P-150 |
150,000 |
50,000~150,000 |
24.0 |
24 |
|
Bio-gel-P-200 |
200,000 |
80,000～200,000 |
34.0 |
48 |
|
Bio-gel-P-300 |
300,000 |
100～400,000 |
40.0 |
48 |
3．琼脂糖凝胶的技术数据
|
型号 |
琼脂糖含量
%（W/W） |
排阻的下限
（分子量） |
分级分离的范围（分子量） |
生产厂家 |
|
Sepharose 4B |
4 |
|
0.3×106～3×106 |
Pharmacia |
|
Sepharose 2B |
2 |
|
2×106～25×106 |
|
Sagavac 10 |
10 |
2.5×105 |
1×104～2.5×105 |
Seravac
|
|
Sagavac 8 |
8 |
7×105 |
2.5×104～7×105 |
|
Sagavac 6 |
6 |
2×106 |
5×104～2×106 |
|
Sagavac 4 |
4 |
15×106 |
2×105～15×106 |
|
Sagavac 2 |
2 |
150×106 |
5×105～15×107 |
|
Bio-gel A-0.5M |
10 |
0.5×106 |
<1×104～0.5×106 |
Bio-Rad
|
|
Bio-gel A-1.5M |
8 |
1.5×106 |
<1×104～1.5×106 |
|
Bio-gel A-5M |
6 |
5×106 |
1×104～5×106 |
|
Bio-gel A-15M |
4 |
15×106 |
4×104～15×106 |
|
Bio-gel A-50M |
2 |
50×106 |
1×105～50×106 |
|
Bio-gel A-150M |
1 |
150×106 |
1×106～150×106 |
4．各处凝胶所允许的最大操作压
|
凝胶 |
最大静水压（kPa） |
|
Sephadex |
|
|
G-10 |
9.8 |
|
G-15 |
9.8 |
|
G-25 |
9.8 |
|
G-50 |
9.8 |
|
G-75 |
4.9 |
5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围
|
凝胶浓度（%） |
线性DNA长度（bp） |
|
0.5 |
1000～30000 |
|
0.7 |
800～12000 |
|
1.0 |
500～10000 |
|
1.2 |
400～7000 |
|
1.5 |
200～3000 |
|
2.0 |
50～2000 |
6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
|
凝胶浓度（%） |
溴酚蓝 |
二甲苯青FF |
|
5．0 |
35bp |
140bp |
|
6．0 |
26bp |
106bp |
|
8．0 |
19bp |
75bp |
|
10．0 |
12bp |
55bp |
|
20．0 |
8bp |
28bp |
7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
|
凝胶浓度（%） |
溴酚蓝 |
二甲苯青FF |
|
3.5 |
100bp |
460bp |
|
5.0 |
65bp |
260bp |
|
8.0 |
45bp |
160bp |
|
12.0 |
20bp |
70bp |
|
15.0 |
15bp |
50bp |
|
20.0 |
12bp |
45bp |
(七)、遗传密码
密码子的第二位
|
密码子的第一位（5’端） |
|
U |
C |
A |
G |
|
密码子的第三位（3端’） |
|
U
|
UUU |
Phe |
UCU |
Ser |
UAU |
Tyr |
UGU |
Gys |
U |
|
UUC |
Phe |
UCC |
Ser |
UAC |
Tyr |
UGG |
Gys |
C |
|
UUA |
Leu |
UCA |
Ser |
UAA |
终止（赭石） |
UGA |
终止（乳白） |
A |
|
UUG |
Leu |
UGG |
Ser |
UAG |
终止（琥珀） |
UGG |
Trp |
G |
|
C
|
CUU |
Leu |
CCU |
Pro |
CAU |
His |
CGA |
Arg |
U |
|
CUC |
Leu |
CCC |
Pro |
CAC |
His |
CGC |
Arg |
C |
|
CUA |
Leu |
CCA |
Pro |
CAA |
Gln |
CGA |
Arg |
A |
|
CUG |
Leu |
CCG |
Pro |
CAG |
Gln |
CGC |
Arg |
G |
|
A
|
AUU |
Ile |
ACU |
Thr |
AAU |
Asn |
AGU |
Ser |
U |
|
AUC |
Ile |
ACC |
Thr |
AAC |
Asn |
AGC |
Ser |
C |
|
AUA |
Ile |
ACA |
Thr |
AAA |
Lys |
AGA |
Arg |
A |
|
AUG |
Met |
ACG |
Thr |
AAG |
Lys |
AGC |
Arg |
G |
|
G
|
GUU |
Val |
GCU |
Ala |
GAU |
Asp |
GGU |
Gly |
U |
|
GUC |
Val |
GCC |
Ala |
GAC |
Asp |
GGC |
Gly |
C |
|
GUA |
Val |
GCA |
Ala |
GAA |
Glu |
GGA |
Gly |
A |
|
GUG |
Val |
GCG |
Ala |
GAG |
Glu |
GGG |
Gly |
G |
(八)、常用酸碱技术参数
1．常见的市售酸碱的浓度
|
溶质 |
分子式 |
分子量 |
mol/L |
g/L |
重量（%） |
比重 |
配制mol/L溶液的加入量（ml/L） |
|
冰乙酸 |
CH3COOH |
60.05 |
17.40 |
1045 |
99.5 |
1.050 |
57.5 |
|
乙酸 |
|
60.05 |
6.27 |
376 |
36 |
1.045 |
159.5 |
|
甲酸 |
HCOOH |
46.02 |
23.40 |
1080 |
90 |
1.200 |
42.7 |
|
盐酸 |
HCl |
36.50 |
11.60 |
424 |
36 |
1.180 |
86.2 |
|
|
|
|
2.90 |
105 |
10 |
1.050 |
344.8 |
|
硝酸 |
HNO3 |
63.02 |
15.99 |
1008 |
71 |
1.420 |
62.5 |
|
|
|
|
14.90 |
938 |
67 |
1.400 |
67.1 |
|
|
|
|
13.30 |
837 |
61 |
1.370 |
75.2 |
|
高氯酸 |
HclO3 |
100.50 |
11.65 |
1172 |
70 |
1.670 |
85.8 |
|
|
|
|
9.20 |
923 |
60 |
1.540 |
108.7 |
|
磷酸 |
H2PO4 |
80.00 |
18.10 |
1445 |
85 |
1.700 |
55.2 |
|
硫酸 |
H2P｀O4 |
98.10 |
18.00 |
1776 |
96 |
1.840 |
55.6 |
|
氢氧化铵 |
NH4OH |
35.00 |
14.80 |
251 |
28 |
0.898 |
67.6 |
|
氢氧化钾 |
KOH |
56.10 |
13.50 |
757 |
50 |
1.520 |
74.1 |
|
|
|
|
1.94 |
109 |
10 |
1.090 |
515.5 |
|
氢氧化钠 |
NaOH |
40.00 |
19.10 |
763 |
50 |
1.530 |
52.4 |
|
|
|
|
2.75 |
111 |
10 |
1.110 |
363.4 |
2．各种浓度的酸碱贮存液的近似pH值
|
溶质 |
1Na |
0.1Na |
0.01Na |
0.001Na |
|
乙酸 |
0.40 |
2.90 |
3.40 |
3.90 |
|
盐酸 |
0.10 |
1.07 |
2.02 |
3.01 |
|
硫酸 |
0.30 |
1.20 |
2.10 |
|
|
柠檬酸 |
|
2.10 |
2.60 |
|
|
氢氧化铵 |
11.80 |
11.30 |
10.80 |
10.30 |
|
氢氧化钠 |
14.05 |
13.07 |
12.12 |
11.13 |
|
碳酸氢钠 |
|
8.40 |
|
|
|
碳酸钠 |
|
11.50 |
11.00 |
|
J a.N为光量浓度[1N≈（1mol/L）×离子价数]。
核酸分子杂交的原理