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实验室常用技术参数资料和各种试剂配制方法
(一)、核酸及蛋白质常用数据
1．核苷三磷酸的物理常数
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化合物 |
分子量 |
λmax(pH7.0) |
1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 |
OD280/OD260 |
|
ATP |
507 |
259 |
15400 |
0.15 |
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CTP |
483 |
271 |
9000 |
0.97 |
|
GTP |
523 |
253 |
13700 |
0.66 |
|
UTP |
484 |
262 |
10000 |
0.38 |
|
dATP |
494 |
259 |
15200 |
0.15 |
|
dCTP |
467 |
271 |
9300 |
0.98 |
|
dGTP |
507 |
253 |
13700 |
0.66 |
|
dTTP |
482 |
267 |
9600 |
0.71 |
2．常用核酸的长度与分子量
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核酸 |
核苷酸数 |
分子量 |
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λDNA |
48502（双链环状） |
3.0×107 |
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pBR322 |
4363（双链） |
2.8×106 |
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28SrRNA |
4800 |
1.6×106 |
|
23SrRNA |
3700 |
1.2×106 |
|
18SrRNA |
1900 |
6.1×105 |
|
19SrRNA |
1700 |
5.5×105 |
|
5SrRNA |
120 |
3.6×104 |
|
tRNA（大肠杆菌） |
75 |
2.5×104 |
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bp DNA
30，000MW蛋白质=810bp DNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kb DNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
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（1）高分子量标准参照 |
（2）中分子量标准参照 |
（3）低分子量标准参照 |
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肌球蛋白 |
分子量 |
磷酸化酶B |
97，400 |
碳酸酐酶 |
31，00 |
|
肌球蛋白 |
212，000 |
牛血清白蛋白 |
66，200 |
大豆脻蛋白酶 |
21，500 |
|
β-半乳糖甘酶B |
116，000 |
谷氨酶脱氢酶 |
55，000 |
抑制剂 |
|
|
磷酸化酶B |
97，400 |
卵白蛋白 |
42，700 |
马心肌球蛋白 |
16，900 |
|
牛血清白蛋白 |
66，200 |
醛缩酶 |
40，000 |
溶菌酶 |
14，400 |
|
过氧化氢酶` |
57，000 |
碳酸酐酶 |
31，000 |
肌球蛋白（F1） |
8，100 |
|
醛缩酶 |
40，000 |
大豆脻蛋白酶 |
21，500 |
肌球蛋白（F2） |
6，200 |
|
|
|
抑制剂 |
|
肌球蛋白（F3） |
2，500 |
|
|
|
溶菌酶 |
14，400 |
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5．常用DNA分子量标准参照物
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λDNA/HindⅢ |
λDNA/EcoRⅠ |
λ/HindⅢ+EcoRⅠ |
pBR322/HaeⅢ |
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23130 |
21226 |
21227 |
587 |
123 |
|
9416 |
7421 |
5148 |
405 |
104 |
|
6557 |
5804 |
4973 |
504 |
89 |
|
4361 |
5643 |
4268 |
458 |
80 |
|
2322 |
4843 |
3530 |
434 |
64 |
|
2027 |
3530 |
2027 |
267 |
57 |
|
564 |
|
1904 |
234 |
51 |
|
125 |
|
1584 |
213 |
21 |
|
|
|
1375 |
192 |
18 |
|
|
|
974 |
184 |
11 |
|
|
|
831 |
124 |
7 |
|
|
|
564 |
|
|
|
|
|
125 |
|
|
|
pBR322/HinfⅠ |
φχ174/HinfⅠ |
φχ174/Hae Ⅲ |
φχ174/TapⅠ |
|
1631 |
726 |
140 |
1353 |
2914 |
|
517 |
713 |
118 |
1078 |
1175 |
|
506 |
553 |
100 |
872 |
404 |
|
396 |
500 |
82 |
603 |
327 |
|
344 |
417 |
66 |
310 |
231 |
|
298 |
413 |
48 |
281 |
141 |
|
221 |
311 |
42 |
271 |
87 |
|
220 |
249 |
40 |
234 |
54 |
|
154 |
200 |
24 |
194 |
33 |
|
75 |
151 |
|
118 |
20 |
|
|
|
|
72 |
|
|
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(二)、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
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pH |
1mol/L K2HPO4(ml) |
1mol/L KH2PO4(ml) |
|
5.8 |
8.5 |
91.5 |
|
6.0 |
13.2 |
86.8 |
|
6.2 |
19.2 |
80.8 |
|
6.4 |
27.8 |
72.2 |
|
6.6 |
38.1 |
61.9 |
|
6.8 |
49.7 |
50.3 |
|
7.0 |
61.5 |
38.5 |
|
7.2 |
71.7 |
28.3 |
|
7.4 |
80.2 |
19.8 |
|
7.6 |
86.6 |
13.4 |
|
7.8 |
90.8 |
9.2 |
|
8.0 |
94.0 |
6.2 |
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
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pH |
1mol/L Na2HPO4(ml) |
1mol/L NaH2PO4(ml) |
|
5.8 |
7.9 |
92.1 |
|
6.0 |
12.0 |
88.0 |
|
6.2 |
17.8 |
82.2 |
|
6.4 |
25.5 |
74.5 |
|
6.6 |
35.2 |
64.8 |
|
6.8 |
46.3 |
53.7 |
|
7.0 |
57.7 |
42.3 |
|
7.2 |
68.4 |
31.6 |
|
7.4 |
77.4 |
22.6 |
|
7.6 |
84.5 |
15.5 |
|
7.8 |
89.6 |
10.4 |
|
8.0 |
93.2 |
6.8 |
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
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核酸分子杂交的原理