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| [ 文章来源： | 文章作者：
| 发布时间：2007-05-28|
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RNA的操作在核酸研究中非常重要，但必须特别注意两个问题：
（一）RNA的降解：由于RNase的存在（如实验器皿、样品、试剂等）且难以清除，使得 RNA 的大幅降解，最终影响 RNA的产量。
（二）RNA完整性：如果在分离纯化中不能保证 RNA的完整性，那么在后续的实验中很难得到完整的cDNA、
本指南旨在提醒研究人员在实验中如何避免上述问题的发生！
各种RNase抑制剂的比较
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产品 |
Erasol |
DEPC |
RVC |
RNasin |
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安全性 |
安全 |
强烈致癌 |
安全 |
安全 |
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特性 |
强有力的RNase 抑制剂，不能在纯化过程中使用。 |
修饰蛋白质和 RNA，不能在纯化过程中使用，与Tris等缓冲液不相容。 |
100%抑制Rnase，可在纯化过程中使用，但会影响 RNA翻译，需最后用苯酚去除。 |
高效RNase抑制剂 可在纯化过程和后
续反应中使用。 |
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使用
方便性 |
简单 |
繁琐 |
简单 |
简单 |
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实验
兼容性 |
不影响RT-PCR等后续反应 |
严重影响RT-PCR等后续反应 |
不影响RT-PCR等后
反应 |
不影响RT-PCR等后续反应 |
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效果 |
高效，比DEPC强10倍以上。 |
一般 |
高效 |
高效 |
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用途 |
实验台和器材处理 |
器材和水的处理 |
用于反应体系中 |
用于反应体系中 |
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经济性 |
便宜 |
便宜 |
一般 |
昂贵 |
一、实验准备
1. 实验台及器材的处理：
RNA实验最好采用专用的实验台和器材，而且必须在使用前进行处理以去除RNase。此点很多人会不太重视，但实际上很可能影响实验结果。
特别推荐：Erasol: RNase的终结者（绝对不含致癌物质！）
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主要用途 |
彻底去除残留在玻璃和塑料等表面的RNase。 |
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适用范围 |
玻璃器皿、塑料器皿、金属器械、实验台面、反应试管等。 |
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产
品
优
点 |
高效快速 |
室温下5分钟内能使多达100μg的RNase失去活性。 |
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使用简单 |
喷后擦干即可,免去高温和DEPC处理,尤其适合于清洁电泳槽,实验台面等不容易用常规方法清洁的地方。 |
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不影响RT/PCR |
Erasol处理离心管后可以直接用于RT-PCR反应。 |
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可重复使用 |
Erasol原液可以重复使用三次而效力不减。 |
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比DEPC水有效 |
Erasol杀灭RNase的效力是DEPC水(含0.1%DEPC)的十倍以上。 |
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安全 |
绝对不含致癌物质！而DEPC强烈致癌。 |
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使
用
操
作
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工作平台的清洁 |
直接将Erasol喷于台面,5分钟后用普通吸水纸擦净,最后用沾有Erasol新鲜稀释液的吸水纸擦净, 晾干。 |
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实验仪器的清洁 |
用浸有Erasol的纸擦拭仪器表面,再用吸水纸擦净,最后用沾有Erasol新鲜稀释液的吸水纸擦净,晾干。用Erasol处理金属器械的时间不能超过5分钟。 |
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玻璃和塑料器皿的清洁 |
喷洒足够多的Erasol将器皿表面全部覆盖,静置处理5分钟后倒弃溶液,用Erasol新鲜稀释液浸泡二次以上,倒立晾干后备用。 |
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移液枪的清洁 |
根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端,留下接口塞和圈套后将其浸放在Erasol中一分钟,用Erasol新鲜稀释液彻底冲洗后,晾干,装回移液枪。 |
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塑料离心管和滴头的清洁 |
将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在Erasol中5分钟以上(最好不要有气泡),然后再用Erasol新鲜稀释液充分浸泡两次,试管或离心管可立即使用或干燥后备用。 (实验发现经Erasol原液处理过的试管或离心管可直接用于RT-PCR,但建议最好用Erasol新鲜稀释液浸泡)。 |
操作须知：使用前请将其稀释1000倍，建议每次使用新鲜液。
注意事项：不能直接加入反应液中，有腐蚀性，避免与皮肤接触。
使用手册：请登录www.biolife.com.cn（技术支持）浏览，或E-mail (info@biolife.com.cn)索取。
订货信息：
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产品名称 |
规格 |
编号 |
价格(元) |
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Erasol |
50 mL |
1209-50 |
140 |
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Erasol |
100 mL |
1209-100 |
240 |
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Erasol |
250 mL |
1209-250 |
490 |
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DEPC |
10ml |
Amresco |
172 |
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RVC |
10ml |
国产 |
490 |
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RNasin |
2500u |
上海Promega N2111S |
225 |
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RNasin |
2500u |
Promega N2111 |
700 |
2.试剂准备: 一般先用DEPC处理水,高压灭菌后备用。再用DEPC处理过的水去配制其它的缓冲液。最后在实验反应液中加入RVC或RNasin进行实验。
3.注意事项: 此试剂为实验台和实验器材处理专用；操作人员应戴手套(须经过Erasol处理)。
二、样品的收集和保存
一般实验样品主要有：血液、组织液、病毒、培养细胞和植物等，每类样品均有其特点，在收集和保存时要予以重视。
注意事项：1. 在样品中加入新鲜保存液（ RNAin）。
2. 尽量避免剧烈的机械操作（刮取细胞、研磨、剪碎等）。
3. 时间尽量短一些。
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主要用途 |
在非冻状态下保持新鲜组织细胞中 RNA分子的完整性。 |
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适用范围 |
RNA病毒、细菌、果蝇、植物组织、动物组织、培养细胞、悬浮细胞 (白细胞、流式细胞仪收集的细胞)等。 |
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产
品
优
点 |
操作简单 |
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替代液氮 |
使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱, 尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。 |
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因 RNAIN能迅速抑制组织中 RNA酶的活性, 故从中提取的 RNA的质量跟液氮保存的样品相比有过之而无不及。 |
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方便运输 |
处理过的样品能在25℃保存一周, 使样品邮寄和运输变得容易和便宜, 有利学术合作和交流。 |
|
反复冻融 |
经 RNAIN处理的样品可反复冻融20次, 其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的 RNA的质量。 |
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结果准确 |
RNAIN进入细胞十分快速, 基因表达在发生应急改变之前就得以锁定, 故 RNA分析更能反映取样时的真实情况。 |
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可比性强 |
RNAIN能减少大规模样品处理中的误差, 增加各次实验数据间的可比性,对大规模基因表达谱的分析尤其有用。 |
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兼容性广 |
虽然处理过的样品最好用 RNAOUT提取其 RNA, 但也能用TRIzol等试剂, 样品还可直接用于组织切片,免疫学和流式细胞分析而不影响 RNA提取的质量。 |
注意事项：不能用于保存冷冻组织和冻融组织。如 RNAIN™有沉淀，用前需加热到37℃, 摇晃, 待其溶解后方可使用。
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定货信息:
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产品名称 |
规格 |
编号 |
价格(元) |
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10ml |
1206-10 |
99 |
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25ml |
1206-25 |
149 |
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50ml |
1206-50 |
299 |
目前此类试剂较多，研究者应根据样品进行选择。一般分为两类：
主要采用异硫氰酸胍和酚类等成分的提取试剂，如Trizol、 RNAout 等。 特别推荐： RNAOUT : RNA快速提取液（10分钟超快速提取！ ）
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主要用途 |
用于从 RNAIN保存的样品中快速提取 RNA, 但也可用于新鲜样品和液氮保存的样品。 |
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适用范围 |
RNAIN保存的样品, 新鲜样品和液氮保存的样品。样品种类涵盖病毒、细菌、昆虫、植物组织、动物组织、培养细胞、悬浮细胞等几乎所有生物学材料。 |
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性能指标 |
RNA产量一般为4-8μg RNA/mg组织, 5-10μg RNA/10E6个细胞。OD260/280一般在1.8-2.0之间。 |
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产
品
优
点 |
操作简单 |
整个过程约10分钟, 比同类产品TRIzol短30分钟, 减少了污染RNase和 RNA降解的机会, 适合大规模样品处理。 |
|
|
强变性剂在裂解细胞或病毒的同时也灭活了内源和外源的RNase, 保证了 RNA的完整性。 |
|
|
酸性条件使 RNA与DNA得以分离, 有机条件使 RNA与蛋白质得以分离。 |
注意事项：不能用于提取DNA和蛋白质，有腐蚀性。
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定货信息:
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产品名称 |
规格 |
编号 |
价格(元) |
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|
10ml(10次提取) |
1207-10 |
149 |
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|
50ml(50次提取) |
1207-50 |
499 |
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100ml(100次提取) |
1207-100 |
699 |
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Trizol |
100ml |
Invitrogen 15596026 |
1460 |
|
|
30次 |
自产 |
460 |
|
|
50次 |
东洋坊NPK-401 |
800 |
|
|
50次 |
东洋坊NPK-200 |
1300 |
SV Total RNA Isolation System |
50次 |
Promega Z3100 |
1430 |
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主要用途 |
适用于异硫氰酸胍/酚/氯仿法难以提取 RNA的真菌样品和植物样品, 迄今为止提过四十余种常见植物(名单见附录), 成功率为100%。 |
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性能指标 |
RNA产量(以100 mg组织计算)一般为种子100-120 ug, 叶片30-60 ug, 果实20-40 ug, OD260/280比值一般在1.9以上。纯化的 RNA可用于Northern分析，PolyA RNA纯化，Dot Blot分析, in vitro转录，RNase保护实验，分子克隆和RT－PCR。 |
|
产
品
优
点 |
操作简单 |
整个过程约15分钟, 室温操作, 比同类产品操作时间短, 减少了污染RNase和 RNA降解的机会,适合大规模样品处理。 |
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|
强变性剂在裂解细胞或病毒的同时也灭活了内源和外源的RNase, 保证了 RNA的完整性。 |
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|
酸性条件使 RNA与DNA得以分离, 有机条件使 RNA与蛋白质得以分离,助提剂能使 RNA与多糖和多酚等成份得以分离,无DNA污染。 |
注意事项：不能用于提取DNA和蛋白质，有腐蚀性。
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定货信息:
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产品名称 |
规格 |
编号 |
价格(元) |
|
|
50次微量提取 |
1218-50 |
790 |
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10次微量提取 |
1218-10 |
198 |
m RNA的纯化一般采用试剂盒，常用试剂盒的订购信息如下：
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5次 |
东洋坊NPK-801 |
2000元 |
PolyATtract m RNA Isolation System II |
3次 |
Promega Z5200 |
1200元 |
PolyATtract m RNA Isolation System III |
15次 |
Promega Z5300 |
1200元 |
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主要用途 |
溶解和保存纯化的 RNA, 用于 RNA的常规保存和的邮寄运输。 |
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适用范围 |
|
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产
品
优
点 |
使用简单 |
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抑制作用强 |
比人胎盘RNase Inhibitor抑制作用强五倍,比氧钒核糖核苷复合物(终浓度20mM)强上百倍。 |
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稳定性好 |
100℃保温30分钟后对RNase的抑制活性没有任何影响。不需要DTT等还原剂, 反应的有效pH范围广。 |
注意事项： RNAMATE会抑制RT-PCR反应， RNA需用LiCl沉淀一次后才能用于RT-PCR反应。
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定货信息:
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产品名称 |
规格 |
编号 |
价格(元) |
|
|
500μl (500u) |
1208-500 |
199 |
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|
1ml (1000u) |
1208-1 |
299 |
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5ml (5000u) |
1208-5 |
1290 |
|
LiCl |
1ml |
1217-1 |
20 |
1. 提取总 RNA的OD260/OD280值一般在1.9以上,OD260/OD230一般在1.8-2.2之间,如果低于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响RT-PCR等反应。 2. 注意不要将 RNA稀释在蒸馏水和DEPC水中检测OD260和OD280,因为蒸馏水和DEPC水的pH值偏酸(约为6.5,由DEPC分解产生的二氧化碳溶于水中变成碳酸引起),使OD260/280比值比在TE中测得的比值低10%-15%。 3. 如果蛋白质污染严重,可以用酚/氯仿抽提后酒精沉淀；如果多糖污染严重,可以用终浓度为2M的LiCl再沉淀 RNA一次；本实验室推荐的产品提取的 RNA一般不含有DNA污染,在极少数情况下如果有DNA污染(RT-PCR反应时不加逆转录酶的反应也有PCR扩增)而该污染又需要去除,则可以用RNase-free DNase处理样品。 1. 电泳时同样要注意RNase的污染问题，若试剂中有Rnase，由于电泳的温度和时间较长，对 RNA会有较大影响。 3. 使用 RNAon即用型 RNA变性上样液可以让你直接电泳上样，不必再单独加变性液，EB和上样液等。 4. 使用 RNAsharp可以帮助克服电泳弥散现象。 6. RNA中是否含有DNA污染需要通过琼脂糖变性胶电泳检测，如果有DNA，则上样孔会有红色荧光物。污染的DNA可以通过加入RNase-free DNase去除。
特别推荐：
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品 名 |
规格 |
货号 |
价格 |
产地 |
RNA Markers （Range: 281-6583bases） |
50ul |
G3191 |
740元 |
Promega |
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Agarose 琼脂糖 |
10g |
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40元 |
Amresco |
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Agarose 琼脂糖 |
100g |
|
260元 |
Amresco |
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100ml |
1215-100 |
149元 |
国产 |
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1.5ml |
1200-15 |
99元 |
国产 |
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10ml |
1213-10 |
149元 |
国产 |
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0.1ml |
1211-01 |
90元 |
国产 |
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各种不同样品DNA提