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从噬菌体文库中提取DNA的方法
[ 文章来源: | 文章作者: | 发布时间:2007-05-17|  字体: [ ]  

cDNA噬菌体文库中提取DNA的方法

1 5ml噬菌体溶液放入无菌干净的小烧杯中,缓缓加入固体NaCl,使其终浓度为1M 0.292g,充分溶解后冰浴1小时。

2 4oC11000g离心10 min,取上清液于另一个干净烧杯中,将PEG6000加入烧杯中使其终浓度为10%(W/V, 0.5),磁力棒缓慢搅拌,冰水浴1.5小时,于4oC15000rpm离心15min,弃上清。

3 将沉淀溶于300ul TEpH 8.0),加等体积的酚/氯仿/异戊醇(25241),吸吐混匀。

4 4oC15000rpm离心15min,取上清液

5 在剩下的酚氯仿异戊醇的溶液中再加入200ulTE,吸吐混匀

6 4oC15000rpm离心15min,取上清液

7 将由46获得的上清液混合,加等体积的氯仿,吸吐混匀后,4oC 15000 rpm离心15min

8 加入1/10体积的3M NaAcpH 5.2)和2.5倍体积的无水乙醇吸吐混匀后至于-80oC30 min以上,于4oC15000 rpm 离心15min,弃上清。

9 沉淀用70%乙醇洗23次,最后一次在4oC15000 rpm 离心5min

10 用冰乙醇洗12次除去水份。

11 沉淀烘干后加入200 ul TE,测定DNA浓度,-20oC保存备用。


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